INVESTIGADORES
COTORRUELO Carlos Miguel
congresos y reuniones científicas
Título:
CARACTERIZACIÓN MOLECULAR DE DOS VARIANTES ALÉLICAS DEL GEN RHD
Autor/es:
PERCARA L; TRUCCO BOGGIONE C; GARCÍA BORRÁS S; LUJÁN M; COTORRUELO C
Lugar:
Zavalla
Reunión:
Congreso; XV Congreso y XXXIII Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2013
Institución organizadora:
Sociedad de Biología de Rosario
Resumen:
El locus RH está compuesto por dos genes
homólogos denominados RHD y RHCE. El gen RHD posee múltiples alelos responsables de expresiones alteradas
del antígeno D (variantes D) y alelos nulos presentes en individuos RhD negativos.
Actualmente se considera que los pacientes con expresión disminuida de los
epitopes D, desarrollan una respuesta inmune luego de la transfusión con
unidades RhD positivas. Sin embargo, estudios recientes demostraron que los
receptores con variantes D débiles tipo 1, 2 y 3, no producen anticuerpos
anti-D. Por otro lado, la presencia de alelos nulos en individuos RhD negativos
es responsable de resultados falsos positivos en las estrategias de
genotipificación RHD. El objetivo de
este trabajo fue caracterizar a nivel molecular dos variantes alélicas del gen RHD. Se estudiaron muestras de sangre
periférica de un paciente (P1) que presentó una expresión débil del antígeno D
evaluada por hemaglutinación y de un paciente (P2) RhD negativo portador de un
alelo RHD detectado por
genotipificación. Se
determinó el fenotipo Rh completo en suspensiones eritrocitarias mediante
técnicas de hemaglutinación utilizando anticuerpos monoclonales anti-D, anti-C,
anti-c, anti-E y anti-e. Se obtuvo ADN genómico a través del método de salting-out. Se analizó por una
estrategia de PCR multiplex la presencia del gen RHD. En el P1 se investigó la presencia de las variantes alélicas D débiles tipo 1, 2, 3 y 4 y de la variante DVII. Posteriormente, en ambas muestras, se amplificaron por PCR
alelo específica cada uno de los diez exones del gen RHD. La muestra del P2, no caracterizada por los métodos
anteriores, fue secuenciada. Los estudios
moleculares realizados en la muestra del P1 demostraron la ausencia de los
exones 7, 8 y 9 del gen RHD sugiriendo
que el fenotipo D variante observado es consecuencia de un alelo híbrido RHD(1-6)-CE(7-9)-D(10) en el cual los
exones RHD específicos ausentes
fueron reemplazados por los homólogos del gen RHCE mediante un fenómeno de recombinación homóloga. Esta variante
alélica introduce el cambio de los aminoácidos Asp350His, Gly353Trp, Ala354Asn
y Glu398Val en la proteína RhD. Por otro lado, los estudios de secuenciación
realizados en la muestra del P2 identificaron una duplicación de 37 pb al comienzo
del exón 4 (IVS3-19 dupl 37) y las mutaciones puntuales 609G>A, 654G>C,
667T>G, 674C>T y 807T>G. Esta última genera un codón de terminación de
la transcripción prematuro. Las mutaciones halladas en esta última variante fueron
compatibles con el alelo RHDy ya descripto en
muestras rr pero a diferencia de lo reportado en la literatura, la variante
hallada en nuestro trabajo fue encontrada en un fenotipo r?r portador del
antígeno C. La caracterización molecular de las variantes D del sistema Rh permitirá
un mejor manejo de la unidades D negativas y un uso racional de la profilaxis
con IgG anti-D. El estudio molecular del locus RH resulta importante
para desarrollar estrategias de tipificación de ADN confiables, que permitan
realizar la genotipificación RHD prenatal y optimizar la selección de
unidades hemocompatibles en los bancos de sangre.