Inmunoglobulina G en subpoblaciones de eritrocitos de distintas edades

ENSINCK A; RUCCI A; COTORRUELO C; GARCÍA BORRÁS S; RACCA L; BIONDI C; RACCA A

Rosario

Congreso; XII Congreso. XXX Reunión Anual. Sociedad de Biología de Rosario; 2010

Sociedad de Biología de Rosario

Los glóbulos rojos (GR) han sido utilizados como un interesante y conveniente modelo para estudiar el envejecimiento celular. Después de 120 días, los GR son eliminados de la circulación por las células del Sistema Mononuclear Fagocítico. Investigaciones recientes sostienen que la unión de IgG autóloga a un neoantígeno asociado a la proteína banda 3 de la membrana eritrocitaria, sería determinante en la remoción de los GR senescentes (Se). El objetivo de este trabajo fue analizar la presencia de IgG unida in vivo a poblaciones eritrocitarias de distintas edades: GR jóvenes (J) y GRSe, obtenidas por dos técnicas diferentes. Se trabajó con muestras de sangre periférica provenientes de dadores voluntarios sin patología demostrable, que concurrieron al Servicio de Hemoterapia del Hospital Provincial del Centenario de Rosario (n=7). Se utilizaron subpoblaciones celulares (GRJ y GRSe): I) separadas por centrifugación en gradientes de Percoll y II) evaluadas por citometría de flujo utilizando parámetros de dispersión de luz. Todas las suspensiones eritrocitorias fueron incubadas con anti-IgG humana marcada con Alexa 488, durante 60 minutos a temperatura ambiente en oscuridad. Posteriormente estas poblaciones celulares se analizaron en el citómetro FACSAria II utilizando los programas FACSDiva y Paint a gate para adquisición y análisis. Se utilizaron GR O RhD positivos sensibilizados con un anticuerpo anti-D de clase IgG obtenido en nuestro laboratorio, como control positivo. Las poblaciones de GR fueron seleccionadas en plots FSC/SSC en escala logarítmica. Los parámetros ensayados fueron evaluados en histogramas y dot-plot (FL1 vs FSC). Los porcentajes de células positivas para IgG fueron: GRJ: 0.04 y GRSe: 2.60 en las poblaciones eritrocitarias separadas según I y GRJ: 0.16 y GRSe: 1.5 evaluadas según II. Estos hallazgos evidencian un incremento significativo de la IgG unida a la membrana en las poblaciones de GRSe. Además los resultados obtenidos indican que las poblaciones eritrocitarias de distintas edades, podrían estudiarse sin realizar una separación física de las células. La evaluación directa de la presencia de IgG por citometría de flujo, permite utilizar pequeñas cantidades de muestras y evitaría la manipulación de la técnica separativa.