Caracterización molecular de alelos DEL en individuos con fenotipo RhD negativo

TRUCCO BOGGIONE C; PRINCIPI C; LUJÁN BRAJOVICH M; MATTALONI S; ENSINCK A; BIONDI C; COTORRUELO C

Virtual

Jornada; I Jornadas de Ciencia y Tecnología de la FBIOyF - UNR; 2021

Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas - UNR

Introducción: diferentes variantes alélicas RHD son responsables del fenotipo Dnegativo. Los alelos RHD nulos originan polipéptidos que no expresan epitopes D o nose integran en la membrana eritrocitaria mientras que los alelos DEL codificanproteínas que expresan una escasa cantidad de epitopes D que no es detectada portécnicas serológicas especializadas. Estudios moleculares han revelado que losfenotipos Del derivan de diferentes rearreglos genéticos como mutaciones puntualesde cambio de sentido, cambios en los sitios de corte y empalme del ARNm,inserciones y deleciones de nucleótidos en la secuencia codificante del gen RHD.Además, este fenotipo está fuertemente asociado a la expresión concomitante delantígeno C o E en la proteína RhCE. Debido a la dificultad para identificar estosfenotipos en los Servicios de Sangre, los dadores portadores de variantes DEL sontipificados erróneamente como D negativo, con el riesgo de inducir unaaloinmunización en receptores D negativo.Resultados: se analizaron 1354 muestras D negativo portadoras de los antígenos Cy/o E provenientes de Tucumán, Córdoba, La Plata, Mendoza, CABA y Rosario. Seobtuvo ADN genómico a través del método de salting-out. En todas las muestras seinvestigó la presencia del gen RHD a través de una estrategia de PCR multiplex queanaliza en forma simultánea dos regiones diferentes del gen RHD. Este estudiopermitió identificar 229 muestras D negativas portadoras de secuencias génicas RHDespecíficas (D-/RHD+). En estas muestras se investigó la presencia de alelos nulos yalelos DEL analizando polimorfismos asociados a los 10 exones del gen RHD(escaneo de exones) y utilizando estrategias de PCR SSP desarrolladas en nuestrolaboratorio, técnicas de microarreglos de ADN y secuenciación. Este estudio permitiódetectar 191 (83,41%) muestras portadoras de alelos nulos y 38 (16,59%) muestrascon fenotipo Del, representando estas últimas el 2,81% de individuos D-CE+. Lasvariantes DEL identificadas a través de los estudios moleculares fueron: RHD*11 (n=6;15,79%), RHD*DEL43 (n=26; 68,43%), RHD*1248insG (n=1; 2,63%), RHD*D-CE(4-9)-D (n=2; 5,26%), RHD*D-CE(4-7)-D (n=1; 2,63%) y RHD*IVS3+1A (n=2; 5,26%).Conclusiones: la alta incidencia (2,81%) de individuos portadores de alelos DEL en elgrupo de muestras D negativo que expresan los antígenos C y/o E revela laimportancia de una correcta caracterización de los polimorfismos responsables de unaexpresión disminuida de los epitopes D en dadores de sangre consideradosserológicamente D negativo. El conocimiento de las bases moleculares de los alelosDEL asociados a los diferentes grupos étnicos resulta fundamental para desarrollarestrategias de genotipificación en individuos D negativo. Esto evitará la transfusión deunidades Del a pacientes con riesgo de aloinmunización.