Estudio molecular de muestras con fenotipo D variante en Argentina

PRINCIPI C; TRUCCO BOGGIONE C; LUJÁN BRAJOVICH M; MATTALONI S; ENSINCK A; BIONDI C; COTORRUELO C

Virtual

Congreso; XVIII Congreso Argentino de Medicina Transfusional; 2021

Asociación Argentina de Hemoterapia, Inmunohematología y Terapia Celular

Fundamento: el fenotipo D variante (Dvar) se caracteriza por una expresión débil del antígeno D y es reconocido serológicamente a través de reacciones de hemaglutinación con antisueros anti-D que presentan intensidades menores a 3+. Algunos fenotipos Dvar son detectados sólo en fase antiglobulina y otros por discrepancias en la tipificación RhD. La disminución en la expresión del antígeno D puede deberse a variaciones cualitativas (fenotipo D parcial) o cuantitativas (fenotipo D débil) de la proteína RhD. Sin embargo, en la mayoría de los casos no es posible realizar esta discriminación con técnicas serológicas siendo necesario recurrir a métodos de biología molecular. Actualmente, se considera que los individuos con expresión débil del antígeno D son susceptibles de desarrollar una respuesta inmunológica luego de la exposición a glóbulos rojos D positivo. Sin embargo, numerosos estudios clínicos han demostrado que los pacientes con fenotipo Dvar originado por los alelos RHD*D débil tipo 1, 2 y 3, no producen anticuerpos anti-D.Objetivos: investigar las bases moleculares responsables del fenotipo D variante en muestras de pacientes de nuestro país.Materiales y Métodos: se estudiaron 788 muestras de sangre de pacientes con fenotipo Dvar. Se determinó el fenotipo Rh completo por técnicas de hemaglutinación utilizando anticuerpos monoclonales específicos. Se obtuvo ADN genómico a través del método de salting-out. Se analizó por una estrategia de PCR multiplex la presencia del gen RHD. Posteriormente, se amplificaron por PCR-SSP cada uno de los diez exones del gen RHD, se investigó la presencia de las variantes alélicas D débiles tipo 1, 2, 3 y 4. Además, mediante estrategias de PCR-SSP desarrolladas en nuestro laboratorio se analizó la presencia de otras variantes D débiles y D parciales. Las muestras no caracterizadas por los métodos mencionados fueron estudiadas mediante microarreglos de ADN y secuenciación de los diez exones del gen RHD.Resultados:Se identificaron las siguientes variantes alélicas: RHD*D débil tipo 1 (n=208) 26,39%, RHD*D débil tipo 2 (n=204) 25,88%, RHD*D débil tipo 3 (n=75) 9,51%, RHD*D débil tipo 4 (n=124) 15,74%, RHD*D débil tipo 5 (n=3) 0,38%, RHD*D débil tipo 6 (n=1) 0,13%, RHD*D débil tipo 8 (n=1) 0,13%, RHD*D débil tipo 15 (n=3) 0,38%, RHD*D débil tipo 45 (n=1) 0,13%, RHD*D débil tipo 48 (n=3) 0,38%, RHD*D débil tipo 59 (n=17) 2,16%, RHD*D débil tipo 64 (n=1) 0,13, RHD*D débil tipo 93 (n=58) 7,36%, RHD*D débil tipo 119 (n=1) 0,13%, RHD*DVII (n=31) 3,93%, RHD*DIV (n=3) 0,38%, RHD*DV (n=3) 0,38%, RHD*DVI (n=28) 3,55%, RHD*DMH (n=3) 0,38%, RHD*DFR-2 (n=5) 0,63%, RHD*325G (n=3) 0,38%, RHD*763A (n=3) 0,38%, RHD*764A (n=2) 0,25%, RHD*911A (n=1) 0,13%, RHD*437G (n=1) 0,13%, RHD*DAU-4 (n=1) 0,13%, RHD*DAU-6 (n=1) 0,13%, RHD*DOL (n=1) 0,13%, RHD*DLO (n=1) 0,13%, RHD*DBS-1 (n=1) 0,13%.Los estudios moleculares permitieron determinar que más del 60% de las muestras con fenotipo Dvar analizadas son portadoras de alelos D débiles tipo 1, tipo 2 y tipo 3. Conclusiones: el predominio de alelos D débiles tipo 1, 2 y 3, característicos de caucásicos europeos indica el aporte de esta etnia al acervo genético de los individuos de nuestro país. La detección molecular de estas variantes permitirá un mejor manejo de la unidades D negativas y un uso racional de la profilaxis con IgG anti-D. El estudio molecular del locus RH resulta importante para desarrollar estrategias de tipificación de ADN confiables, que permitan optimizar la selección de unidades a transfundir en los Bancos de Sangre.