Purificación de lactoferrina de calostro bovino por cromatografía de afinidad sobre membranas

J WOLMAN, FEDERICO; E SMOLKO, EDUARDO; MARIANO GRASSELLI,; OSVALDO CASCONE

San Miguel de Tucumán

Congreso; Simposio Internacional de Biotecnología; 2004

  La lactoferrina (Lf) es una proteína de peso molecular 78 kDa que encuentra aplicación en preparados farmacéuticos y nutracéuticos, leches maternizadas, etc. Las fuentes más accesibles para la obtención de Lf bovina son la leche, el calostro y el suero del queso, de donde tradicionalmente se la extrae por métodos cromatográficos de intercambio iónico, aunque en la actualidad se han desarrollado métodos por cromatografía de afinidad que pueden extraerla de soluciones más diluidas. En la actualidad, la cromatografía sobre membranas se presenta como una alternativa industrial muy interesante, donde la resolución se independiza del flujo y por lo tanto las separaciones se realizan en tiempos mucho menores que en la cromatografía convencional en geles blandos. En este trabajo hemos obtenido membranas de fibra hueca de polisulfona con Red HE-3B covalentemente unido y hemos comprobado su utilidad para la purificación de Lf de calostro bovino. Las fibras (diámetro de poro 0,65 µm, porosidad 80%, diámetro interno 0,75 mm, diámetro externo 1,25 mm) fueron sumergidas en una solución de monómeros acrílicos y luego sometidas a radiación gamma para injertar un polímero de dichos monómeros sobre la superficie de los poros. El porcentaje de injerto fue de 27%. Luego las membranas injertadas fueron tratadas con amoníaco para transformar los grupos epóxido en aminos y después el colorante Red HE-3B fue unido a la membrana por reacción de su grupo triazina. La permeabilidad de las membranas sólo sufrió una reducción del 10% por efecto del injerto y la inmovilización del colorante (de 2,89 a 2,60 ml/cm2.min.bar) Las isotermas de adsorción en el equilibrio permitieron calcular una capacidad máxima de 110,2 mg de Lf por ml de membrana, con una constante de disociación de 0,75 mg/ml. Este valor de capacidad supera al obtenido con el mismo colorante unido a agarosa, de forma tal que la productividad se incrementa enormemente al implementarse esta tecnología de membranas. Al utilizar calostro bovino como fuente de Lf, el sistema de membranas adsorbió el 91 % de la proteína, mientras que la adsorción en geles blandos fue del 56 %. El porcentaje de elución también fue superior en los sistemas convectivos (99 % vs 80 %).