Diseño de un proceso de purificación masiva de proteínas recombinantes en larvas de lepidópteros

LEVIN, GUSTAVO JAVIER; LOUSTAU, MARÍA DE LAS NIEVES; ROMERO, LUCÍA VIRGINIA; NAVARRO DEL CANIZO, AGUSTIN A.; MIRANDA, MARÍA VICTORIA; CASCONE, OSVALDO

Buenos Aires

Congreso; ETIF 2006; 2006

Etif

                       La utilización de larvas de lepidópteros como biofábricas permite obtener altos niveles de proteínas recombinantes a bajo costo. Las larvas de Rachiplusia nu son susceptibles a la infección con el virus de la poliedrosis nuclear Autographa californica (AcMNPV), pudiéndose infectar inyectándoles virus brotado en hemolinfa o por alimentación con poliedros. La infección oral es menos laboriosa, especialmente cuando se cuenta con un gran número de insectos. Se ha estudiado la expresión y purificación de la isoenzima C de peroxidasa de Armoracia rusticana (horseradish peroxidase, HRPC) como proteína modelo en larvas de insectos. La secuencia genética de la HRPC se modificó en el extremo N con polihistidina y en el extremo C con poliarginina para  facilitar el downstream processing por aplicación directa del extracto crudo a matrices de intercambio iónico o afinidad. Además se ensayaron dos estrategias para la obtención de baculovirus pol+ para la infección por vía oral de larvas mientras se alimentan con dietas artificiales en el laboratorio. Se obtuvo un nivel de expresión de HRPC de 288,2 mg/Kg de larvas y se purificó con un rendimiento de 89,2 %. Este esquema de trabajo puede aplicarse para la producción de otras proteínas de interés para la industria farmacéutica.