Obtención de poliedros mixtos para la producción masiva de peroxidasa recombinante en larvas de insectos

ROMERO, LUCÍA VIRGINIA; LEVIN, GUSTAVO JAVIER; LOUSTAU, MARÍA DE LAS NIEVES; TABOGA, OSCAR; CASCONE, OSVALDO; MIRANDA, MARÍA VICTORIA

Buenos Aires

Congreso; Biolatina 2006; 2006

Foro Argentino de Biotecnología

  La utilización de larvas de Lepidópteros como biofábricas permite obtener altos niveles de proteínas recombinantes a bajo costo. Las larvas de Rachiplusia nu son susceptibles a la infección con el virus de la poliedrosis nuclear Autographa californica(AcMNPV), pudiéndose infectar inyectando virus brotado en hemolinfa o por alimentación con poliedros. La infección oral es menos laboriosa, especialmente cuando se cuenta con un gran número de insectos. Sin embargo, la mayoría de los plásmidos utilizados resultan en la formación de baculovirus recombinantes con fenotipo occ- , que no se ocluyen en poliedros, lo que redunda en una bajísima eficiencia de infección. El objetivo de este trabajo fue obtener poliedros mixtos para la expresión de peroxidasa en larvas de R. nu. Se coinfectó una línea celular Sf9 (3,75 x 105 células) con virus recombinante de fenotipo poliedrina- donde el gen de poliedrina fue reemplazado por el de peroxidasa (AcMNPHRP, 2,4 x 108ufp/ml) y virus helper salvajes de fenotipo poliedrina+(1,9 x 108 ufp/ml). Al 4º día postinfección se colectaron las células por centrifugación (5000 g,  5 min) y se lisaron con SDS 0,5 %. Los poliedros se aislaron por centrifugación y se resuspendieron en agua destilada a una concentración final de 1,19 x 108 /ml. Se infectaron larvas del 4º estadio con una dosis de 2,18 x 106 pol/100 mg de dieta artificial. Al 3º día la concentración de peroxidasa en hemolinfa fue de      U/ml, demostrándose la posibilidad de obtener fácilmente inóculo por cooclusión de virus recombinante con salvaje.