MODULACIÓN DE AKT DEPENDIENTE DEL 1alpha,25(OH)2D3 DURANTE LA PROLIFERACION Y DIFERENCIACION DE CELULAS MUSCULARES ESQUELETICAS?

BUITRAGO CLAUDIA GRACIELA; ARANGO NADIA; BOLAND R

Congreso; Reunión Anual de la Asociación Argentina de Osteología y Metabolismo Mineral; 2011

1,25(OH)2D3 induce respuestas rápidas no-genómicas a través de la activación de Src y MAPKs en la línea celular de músculo esquelético murino C2C12. En este trabajo investigamos la modulación de Akt por la hormona.Las células C2C12 constituyen un modelo apropiado para estudiar la miogénesis debido a que pueden permanecer en la etapa proliferativa (mioblastos) o diferenciarse en fibras musculares. En células C2C12 proliferativas, el 1,25(OH)2D3 activa Akt por fosforilación de Ser473 en forma dependiente del tiempo (5-60 minutos). Cuando estas células son pre-tratadas con metil-beta-ciclodextrina para desensamblar los microdominios caveolares, la activación de Akt inducida por el 1,25(OH)2D3 fue suprimida, indicando que es necesaria la acción de la hormona a nivel de las caveolas para la señalización intracelular posterior. Resultados similares fueron obtenidos cuando la expresión de caveolina-1 fue silenciada con siARN. PI3K y p38 MAPK (pero no ERK1/2) participan en la activación de Akt dependiente de la hormona en los mioblastos. La intervención de p38 MAPK en la fosforilación de Akt parece ocurrir a través de la proteína MK2 (MAPK-activated protein kinase 2). Además, demostramos que Src participa en la fosforilación de Akt por el 1,25(OH)2D3 utilizando el inhibidor PP2 y oligonucleótidos antisentido que suprimen la expresión de Src. Observaciones preliminares implican a PI3K en los efectos proliferativos de la hormona sobre los mioblastos. Durante las etapas tempranas de la diferenciación de células C2C12 (determinada por el aumento la expresión de MHC y miogenina), observamos que el 1,25(OH)2D3 también incrementa la fosforilación de Akt (sin afectar sus niveles proteicos) y la activación de Src. De relevancia, en esta etapa celular Src y PI3K están involucradas en la modulación positiva de Akt y en el aumento de la expresión de MHC y miogenina inducido por el 1,25(OH)2D3, de acuerdo con el rol de la hormona en promover la diferenciación de las células musculares. En conjunto, estos resultados sugieren que la activación de Akt, via Src, PI3K y p38 MAPK, está asociada a la regulación por 1,25(OH)2D3 de la miogénesis en las células C2C12.