"Eventos tempranos en la señalización intracelular del calcitriol en el músculo esquelético: rol del VDR"

BUITRAGO C

Congreso; Reunión Anual de la Asociación Argentina de Osteología y Metabolismo Mineral; 2010

En células de músculo esquelético hemos investigado las vías de transducción de señales de las MAPKs que son moduladas por el calcitriol [1a,25(OH)2D3]. Sin embargo, el comienzo de la señalización de esta hormona que desencadena acciones rápidas no genómicas no ha sido establecido para ningún tipo celular. La tirosina quinasa Src es una molécula clave “upstream” en la regulación de las vías MAPKs por el 1a,25(OH)2D3. En células C2C12, determinamos que PKC participa en la activación de Src y que PKCd es activada por la hormona. Queda pendiente implicar a esta isoforma en la regulación de Src dependiente del 1a,25(OH)2D3. PKC modularía la actividad de Src a través de PTPa, como en otros tipos celulares (Harper and Sage, 2006), ya que el 1a,25(OH)2D3 estimula la fosforilación en tirosina (Y789) y en serinas de PTPa, al mismo tiempo que promueve el aumento de la actividad catalítica de PTPa en forma dependiente de PKC. De relevancia, reportamos que la hormona induce la co-localización y co-inmunoprecipitación temporal entre PTPa y Src. Análisis computacionales realizados en colaboración con el Dr. Costabel revelaron que la interacción electrostática entre Src y PTPα es favorecida cuando PTPα está forforilada en Y789. Por otro lado, nuestros resultados muestran que en células C2C12 las caveolas son de importancia en las respuestas rápidas del 1a,25(OH)2D3. La disrupción de caveolas con MbCD y el silenciamiento de caveolina-1 (cav-1) suprimieron la estimulación de ERK1/2 y p38 MAPK y disminuyeron significativamente la activación de Src por la hormona. Se demostró que en condiciones basales existe una co-localización entre cav-1 y Src en la zona periplasmática de la membrana celular. El pretratamiento de las células con MβCD provoca que ambas proteínas co-localicen en el citosol. La exposición de las células al 1a,25(OH)2D3  disrumpe la co-localización de cav-1 con Src y redistribuye estas proteínas en el citoplasma y núcleo celular. La preincubación con MbCD antes de la estimulación hormonal mantiene la co-localización de Src y cav-1 en el núcleo. Estos resultados se corroboraron por ensayos de co-inmunoprecipitación. Hipotetizamos la existencia de un complejo multimolecular dinámico participando en el inicio de la señal de esta hormona.