Difusión de lisogenia en Lactobacillus delbrueckii. Caracterizaci¨®n preliminar de dos fagos temperados aislados de una cepa comercial de Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis.

SU¨¢REZ, VIVIANA B.; ZAGO, M.; QUIBERONI, A.; BINETTI, A. G.; CARMINATI, D.; GIRAFFA, G.; REINHEIMER, J. A.

Buenos Aires

Congreso; III Congreso Argentino de Microbiolog¨ªa; 2006

Asociaci¨®n Argentina de Microbiolog¨ªa

                Se estudi¨® la presencia de profagos en 16 cepas de L. delbrueckii, 11 aisladas de fermentos artesanales utilizados en la elaboraci¨®n de quesos italianos y 7 aisladas de fermentos comerciales ampliamente utilizados en nuestro pa¨ªs. Todas las cepas pose¨ªan el gen de la integrasa y la diversidad entre ellas se estudi¨® por RAPD-PCR (primer M13). Se indujo con Mitomicina C (0.5 ¦Ìg/ml) y los inducidos se testearon sobre todas las cepas para encontrar aquellas posibles hospedadoras. Esta b¨²squeda se realiz¨® mediante el test en medio l¨ªquido, spot-test y test de la microplaca. Se procedi¨® al aislamiento de los fagos temperados en el caso de que los fagos se pudieran propagar y, en caso contrario, a la determinaci¨®n de la presencia de part¨ªculas ¡°killer¡± (no propagables), usando c¨¦lulas no proliferantes.                 En el 37%  (6 cepas) de las cepas se pudo encontrar al menos una cepa hospedadora. De los 6 inducidos, 3 provinieron de cepas comerciales y 3 de cepas salvajes. Solamente el inducido proveniente de la cepa comercial Cb1 (L.delbrueckii subsp. lactis) result¨® capaz de propagar sobre dos cepas, L.l.204 y L.b.342. Estos fagos (§¶Cb1/204 y §¶Cb1/342) se caracterizaron analizando morfolog¨ªa (microscop¨ªa electr¨®nica), perfiles de restricci¨®n de ADN, mecanismos de empaquetamiento y presencia, por PCR, de fragmentos conservados para fagos de L.delbrueckii de los genes que codifican la prote¨ªna mayoritaria de la cola y la lisina, espectro de hospedadores, influencia de la presencia de iones Ca2+ en la lisis en medio l¨ªquido y % de adsorci¨®n. Los 5 inducidos restantes no pudieron ser propagados, pero se demostr¨® la posibilidad de la presencia de part¨ªculas f¨¢gicas defectuosas, incapaces de propagar m¨¢s de 1 ciclo viral. La sensibilidad cruzada realizada entre los dos fagos y las dos cepas muestra una lisis tard¨ªa del §¶ Cb1/342 sobre la cepa L.l 204. Ambos fagos necesitan la presencia de iones Ca2+ para completar la lisis, pero el ensayo de adsorci¨®n con y sin iones Ca2+ revel¨® que estos no influyen en esta primera etapa del ciclo l¨ªtico. La tasa de adsorci¨®n (30 min) fue similar para ambos fagos (99%), sugiriendo la posibilidad de alg¨²n mecanismo intracelular de resistencia en la cepa L.l 204 que retardar¨ªa la lisis en medio l¨ªquido. Los perfiles de restricci¨®n mostraron diferencias cuando el ADN gen¨®mico de ambos fagos fue tratado con endonucleasas de restricci¨®n.                 Este estudio demuestra la existencia de lisogenia en L. delbrueckii y su consecuente peligrosidad en el uso de estas cepas en elaboraciones industriales. Particularmente, la cepa comercial Cb1, usada ampliamente en nuestro pa¨ªs, es fuente de part¨ªculas f¨¢gicas que podr¨ªan infectar a otras cepas de fermentos comerciales.