Asociación entre la concentración de cobre y ceruloplasmina en plasma con la concentración en líquido folicular en bovinos

PERUZZO E; TESTA J; PELLEGRINO, FRANCISCO JAVIER; RISSO, ANALÍA; ARIAS R; PICCO SJ

Casilda

Exposici�n; IV Reunión Transdisciplinaria en Ciencias Agropecuarias 2019; 2019

Universidad Nacional de Rosario

El cobre (Cu) es un nutriente esencial al cual se le atribuye un rol antioxidante. El 90 % del Cu en plasma se encuentra unido a la ceruloplasmina (CP), siendo la principal forma de transporte de Cu desde el hígado hacia los tejidos2. En rodeos bovinos de la Argentina, el método tradicional de diagnóstico a campo de la deficiencia Cu es la determinación de la concentración plasmática (cupremia). Bajas concentraciones de Cu en sangre (hipocupremia) han sido asociadas con fallas reproductivas1. Sin embargo, se desconoce la forma en que la hipocupremia puede afectar al ovocito. Teniendo en cuenta que el proceso de maduración del ovocito ocurre en el ambiente folicular, surge la necesidad de saber si las concentraciones plasmáticas de Cu y CP se asocian con las presentes en el líquido folicular (LF).Por lo expuesto, el objetivo del presente trabajo fue determinar si las concentraciones de Cu y CP en plasma se asocian con las concentraciones en el LF. Al respecto hipotetizamos que los niveles plasmáticos de Cu y CP no se asocian a los del LF, siendo más bajos en este último compartimiento.Para la realización de los experimentos se tomaron muestras pareadas de sangre y ovarios de vacas en frigorífico. Las muestras de sangre se centrifugaron a 3000 rpm por 10 minutos. Se obtuvieron muestras de plasma (1,5 mL) que fueron almacenadas en tubos de 2 mL. Para la obtención de LF se realizaron aspiraciones de los folículos ováricos con jeringa de 10 ml y aguja 18G 40/12. Se realizaron 2 experimentos por separado. En el primer experimento se determinó la existencia de asociación entre Cu en plasma y en LF en 260 vacas. En el segundo experimento se evaluó la existencia de asociación entre CP en plasma y en LF en 60 vacas. Para las determinaciones de Cu plasmático y folicular se realizó una digestión acida con ácido tricloroacético (TCA) al 10%, para lo cual se utilizó una relación 1:1 de plasma o LF y ácido. La digestión ácida se realizó en tubos de vidrio de 5 mL. En cada tubo se incorporó 1 mL de plasma o LF y 1 mL de TCA. Inmediatamente se procedió al homogeneizado por agitación con Bortex. Finalmente, se centrifugó a 7000 rpm durante 5 minutos. El líquido sobrenadante se trasvasó a tubos de 2 mL para su determinación por espectrofotometría de absorción atómica de llama (Perkin Elmer 200). La determinación de CP se realizó en tubos de 12 x 75 mm de vidrio. Se utilizaron 2 tubos por muestra (reactivo y blanco). Dentro de cada tubo se colocaron 2 mL de una solución buffer de acetato 0.1 M formada por 43 mL de una solución de acetato de Na 0,2 M, 7 mL de una solución de ácido acético 0,2 M y 40 mL de agua destilada. Luego se agregó 0,1 mL de suero o LF a ambos tubos. Luego se agregó 1 mL de solución de p-phenildiamine (PPD) 27.6 M, formada por 0.5 g de PPD y solución buffer de acetato en un volumen final de 100 mL ajustado a pH 5.45. Los tubos se colocaron en baño maría a 37°C por 5 minutos. A los tubos blanco se le agregó 50 µL de ácida de Na 1.5 M. Estos fueron llevados nuevamente a baño maría por 30 minutos. Pasado este tiempo se agregó 50 µL de ácida de Na a los tubos reactivo. El contenido de los tubos se trasvaso a microcubetas y se realizó la lectura en espectrofotómetro UV visible PerkinElmer a 1 cm de la trayectoria de la luz. La absorbancia se midió a 530 nm de longitud. La concentración de CP se calculó a través de la siguiente ecuación CP mg/dl = (0,752 x (Absorbancia del tubo reactivo - Absorbancia del tubo blanco)) x 1000/10. Las correlaciones de Cu en plasma y LF y de CP en plasma y LF se determinaron usando el modelo de correlación del programa estadístico SAS 9.0.La correlación para el Cu en plasma y LF fue 0,88 (P