Evaluación de un sistema de PCR en tiempo real para la detección de Escherichia coli O157:H7 a partir de carne bovina molida

BRUSA V.; PALACIOS M.; LOUP V.; COPES J.; PINEDA G.; BROCARDO S.; ALIVERTI V.; ALIVERTI F.; GALLERI D.; PERAL GARCIA P.; PELLICER K.; LEOTTA G.A.

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Microbiología; 2010

Asociación Argentina de Microbiología

La infección por Escherichia coli O157:H7 es causa de diarrea con o sin sangre, colitis hemorrágica y síndrome urémico hemolítico (SUH) en humanos. El principal reservorio animal de E. coli O157:H7 son los bovinos y la carne bovina molida es una potencial fuente de infección. El objetivo de este trabajo fue evaluar un sistema comercial de PCR en tiempo real para la detección de E. coli O157:H7. Se contaminaron experimentalmente 50 muestras de carne molida bovina con 10 cepas de E. coli O157:H7 (10, 100 y 1000 UFC/25 g) y 20 cepas de bacterias E. coli no O157:H7 (1000 UFC/25 g). Como tamizaje se utilizó el sistema de PCR en tiempo real R.A.P.I.D. LT Food Security System y el kit comercial E. coli O157:H7 LT Test kit (Idaho Technologies Inc., UTA, EE.UU.), siguiendo las instrucciones específicas del fabricante. Se determinó límite de detección, selectividad y robustez. Todas las muestras contaminadas con diferentes concentraciones de E. coli O157:H7 fueron positivas. El límite de detección dependió de la cepa analizada y la concentración bacteriana con la que se contaminaron las muestras, el valor mínimo fue 6,1 UFC/25 g. Se obtuvo un 100% de inclusividad y un 100% de exclusividad. Todos los resultados fueron reproducibles al analizar las muestras contaminadas con 10 cepas de E. coli O157:H7 en 3 días consecutivos y por 3 operadores. El sistema evaluado en este trabajo se basa en PCR en tiempo real y utiliza sondas específicas marcadas con fluorógenos para la detección de los amplicones generados en el proceso. La técnica evaluada es una alternativa apropiada para la detección de E. coli O157:H7 a partir de carne bovina molida. Si bien este sistema de PCR en tiempo real  cuenta con la validación AOAC Internacional (AOAC Nº 100901), en el presente trabajo se demostró su utilidad para la detección de cepas de E. coli O157:H7 circulantes en Argentina.