Acetilación de histonas en Trypanosoma cruzi. Nuevas herramientas para el estudio de la expresión génica

MEYER CG; TORRES HN; FLAWIÁ MM; ALONSO GD

Mendoza, Argentina.

Congreso; VII Congreso Argentino de Protozoologia y Enfermedades Parasitarias.; 2005

Sociedad Argentina de Protozoologia.

En eucariotas superiores la expresión génica esta regulada a nivel de inicio de la transcripción y es influenciada por la estructura de la cromatina. La estructura nucleosomal constituye una verdadera barrera que dificulta la interacción con el aparato transcripcional. La acetilación de histonas ocurre en las secuencias laterales, que no forman parte del centro del nucleosoma, y contribuye a desestabilizar la interacción entre el ADN y las histonas. Simultáneamente a la descripción de las acetiltransferasas de histonas se describieron genes para deacetilasas específicas y se propuso que la acetilación de las histonas alivia la represión, en tanto que la deacetilación la restablece. En las bases de datos de T. cruzi (TIGR), se encontraron marcos abiertos de lectura con identidad para proteínas con actividad de histona acetil transferasas (TcHAT1 y TcHAT2) y otros que mostraban identidad con deacetilasas (TcHDAC y TcSir2). TcHAT1 y TcHAT2 codifican para sendos péptido de 482 y 568 aminoácidos respectivamente y presentan dominios característicos de la familia de proteínas MYST. Estas secuencias fueron subclonadas en el vector pET22b+ y expresadas en sistemas bacterianos. Luego de la inducción se obtuvieron polipéptidos del tamaño esperado que fueron evaluados en ensayos de acetilación de histonas. Las enzimas involucradas en la deacetilación también fueron amplificadas por PCR y expresadas en E. coli. Por último, para evaluar la acetilación de histonas en epimastigotes de T. cruzi, se realizó una extracción ácida obteniéndose una fracción enriquecida en histonas que mostró señal positiva al ser sometida a SDS-PAGE y Western blot con anticuerpos comerciales específicos para acetilación en Lys 9 y 14 de la histona H3. Estos hallazgos son la primera evidencia que indica un posible control epigenético en T. cruzi.