Familia de Reductasas de Citocromo P-450 en Trypanosoma cruzi.

PORTAL PATRICIO; FERNÁNDEZ VILLAMIL SILVIA; ALONSO GUILLERMO D; FLAWIÁ MIRTHA M; TORRES HÉCTOR N; PAVETO CRISTINA

Huerta Grande, Córdoba, Argentina.

Congreso; XXI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología.; 2006

La citocromo P-450 reductasa (CPR) actúa como flavoproteina dadora de equivalentes de reducción requeridos por los sistemas de oxidasas de función mixta.  En el proyecto genoma humano se han identificado 57 genes funcionales de citocromo P450,  involucrados en la detoxificación de xenobióticos y la síntesis de esteroides entre otras funciones. A pesar de los numerosos genes funcionales para el citocromo  P450, existe un solo gen para la CPR en cada especie. En T.cruzi se ha demostrado bioquímicamente la existencia tanto de citocromo P450 como de su reductasa. Utilizando la información del proyecto genoma de T.cruzi hemos identificado tres secuencias correspondientes a CPR que contienen los dominios FAD, FMN y de unión a NADPH. Dos de ellas fueron clonadas, expresadas y caracterizadas bioquímicamente. Las tres (TcCPR-A, B y C) se expresan al menos en el estadio de epimastigote. TcCPR-A y TcCPR-B fueron capaces de reducir in vitro a sustratos alternativos y de participar en procesos de de-aminación y de-etilación dependientes de Citocromo P450 medido en un sistema heterólogo in vitro. Epimastigotes de T. cruzi de la cepa  CL Brener fueron transfectados con el plásmido pTREX conteniendo las secuencias TcCPR-A y TcCPR-B. La transfección de TcCPR-B fue verificada por Southern blot. La sobreexpresión se confirmó por Western blot y aumento de la actividad específica respecto de los parásitos WT. Los parásitos transfectados con  TcCPR-A no fueron viables, lo que permite suponer que la presencia del transgen resultaría letal. La sobre-expresión de TcCPR-B en epimastigotes aumentó su resistencia a las drogas Nifurtimox (50µM) y Benznidazol (2.5µM) con respecto a los parásitos que sobre-expresaban GFP, sugiriendo la mayor capacidad de los parásitos transgénicos de metabolizar dichos compuestos.