Análisis de expresión de las metiltransferasas putativas TcSET20 y TcSET23 en los distintos estadios del ciclo de vida de Trypanosoma cruzi

SANTIAGO CARENA; ARTURO MUÑOZ-CALDERÓN; GUILLERMO ALONSO; JOSEFINA OCAMPO

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; XXXIII REUNIÓN ANUAL DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE PROTOZOOLOGÍA; 2022

Sociedad Argentina de Protozoología

Trypanosoma cruzi, causante de la enfermedad de Chagas, posee un ciclo de vida que alterna entre un insecto vector y un reservorio vertebrado, exponiéndose a cambios abruptos en su entorno. Como respuesta a estos cambios, el parásito es capaz de alternar entre tres estadios bien definidos: epimastigote, forma replicativa extracelular presente en el insecto; tripomastigote, forma infectiva no replicativa; y amastigote, forma replicativa intracelular, capaz de diferenciarse nuevamente al estadio tripomastigote y lisar la célula comenzando un nuevo ciclo. Su alternancia entre estadios involucra cambios en la expresión génica, regulados mayormente a nivel post-transcripcional. No obstante, está en parte modulada a nivel epigenético, mediante modificaciones post-traduccionales de histonas. Dentro de los modificadores de histonas, se encuentran las metiltransferasas SET. En el genoma de T. cruzi existen diversos genes de esta familia, sin embargo, no han sido caracterizadas hasta el momento. En este trabajo nos enfocamos en estudiar TcSET20 y TcSET23 por presentar propiedades conservadas respecto a SETs prototípicas estudiadas en otros organismos. Para comenzar la caracterización, evaluamos la expresión de sus ARN mensajeros (ARNm) mediante RT-PCR. Utilizando parásitos de la cepa CL Brener, comprobamos que ambos ARNm se expresan en los estadios de epimastigote y tripomastigote. Adicionalmente, pudimos evidenciar mediante clonado y secuenciación de los amplicones obtenidos, que el ARNm correspondiente a TcSET23 posee dos isoformas que serían producto de un proceso de trans-splicing alternativo, difiriendo únicamente en el largo de la región 5’ no codificante. Cómo estudios complementarios, analizaremos la expresión mediante RT-PCR cuantitativa y lo extenderemos al estudio de amastigotes. En paralelo, hemos clonado los genes de ambas TcSETs en estudio en el vector pTcINDEX-GFP para iniciar la caracterización de sus funciones biológicas mediante sobreexpresión.