EFECTO DEL ÁCIDO OXÁLICO EN LA PRODUCCIÓN DE PROTEASAS DEL HONGO Beauveria bassiana

COMELLI NORA A.; FERNANDEZ CECILIA DE LOS A.

Mendoza

Congreso; Sociedad Biologica de Cuyo. BIOCELL; 2020

La lucha contra Varroa destructor patógeno de Apis mellífera representa un desafío por el incremento de resistencias a los tratamientos convencionales. Dos nuevas estrategias se presentan como prometedoras en la eficacia acaricida frente a la plaga: el uso de ácido oxálico y el manejo de hongos entomopatógenos como agentes de control biológico. Se ha demostrado que el ac. oxálico puede actuar como factor de virulencia, por lo tanto planteamos como objetivo de este trabajo evaluar la capacidad del ácido oxálico de incrementar las secreciones enzimáticas con actividad proteolítica en cepas de B. bassiana. El protocolo utilizado se basó en el descripto por Jiménez et al. (2010). Se prepararon medios de cultivo agregando concentraciones variables de ácido oxálico utilizando como base Agar Dextrosa Sabouraud (ADS). Los componentes de cada medio fueron colocados en un erlenmeyer. Posteriormente, se colocaron 100 ml de cada medio en 6 erlenmeyers de 250 ml. Por último, los medios se esterilizaron durante 20 minutos a 121ºC. A partir del aislamiento de Beuaveria b. nativo (CEPA 1), se tomó una asada con la cual se inocularon los medios. Luego los erlenmeyers se mantuvieron en agitación constante (110 rpm) durante 120 horas a temperatura ambiente. Trascurrido este tiempo, los medios fueron filtrados utilizando un kitasato con papel filtro para remover el micelio. Se utilizaron 6 tiras de radiografía, con las siguientes dimensiones: 1 cm de ancho por 10 cm de alto, con una superficie total 10 cm2. Las tiras fueron sumergidas en 5 ml de la solución enzimática cruda proveniente de cada erlenmeyer. Después de cierto tiempo, se retiraron del medio líquido y se lavaron suavemente con agua. El ensayo se realizó por triplicado. Se usó como indicador de proteasas presentes la degradación de la gelatina, la cual se manifiesta con el desprendimiento de la emulsión en la placa y se expresó como resultado el porcentaje de la placa degradado promedio de cada tratamiento. La cepa ensayada creció en los tres medios propuestos, aunque la actividad proteolítica detectada se vio notablemente incrementada al introducir en el medio de cultivo el ácido oxálico. Los valores obtenidos fueron para el Testigo del 13, 05% de degradación de las placas, para la Cepa 1 en medio ADS-Ox 0,1 M fue del 25%, y para la Cepa 1 en medio ADS-Ox 0,15 M fue del 45,55 %. La presencia del ácido oxálico podría constituir un factor importante en la inducción de la liberación de proteasas modificando el pH, sin embargo requiere de más estudio el poder determinar el efecto global y sobre todo vincularlo al proceso de patogénesis del hongo sobre Varroa. Otro factor que debe considerarse es la concentración de carbohidratos en el medio de cultivo, ya que está comprobado que reprimen la producción de proteasas (Jiménez et al., 2010). Caso contrario sucede con la concentración de proteínas, que además brindan al hongos un medio rico en nitrógeno para la síntesis, de esta forma se induce la producción y secreción de proteasas ácidas (Sumantha et al., 2006). Estos factores pueden tenerse en cuenta a la hora de activar los cultivos de cepas entomopatógenas a ser utilizadas en programas de control biológico.