Endoesterolytic activity in proteolytic extract of Acacia caven (Mol) Molina and Solanum granuloso-leprosum

ADARO, MAURICIO; VALLÉS, DIEGO; BARCIA, CRISTINA; BARBERIS, SONIA

Estancia Grande - San Luis.

Congreso; XXXII Reunión Científica Anual de la Sociedad de Biología de Cuyo; 2014

Sociedad de Biología de Cuyo

Las proteasas son el grupo de enzimas hidroliticas más utilizados a escala industrial. La actividad esterolítica de acaciaina y granulosaina se determinó por el método de Silverstein (1974) modificado de acuerdo a las condiciones óptimas de la enzima. La actividad se estudió usando ésteres de N-alfa carbobenzoxi-p-nitrofenol de algunos aminoácidos como sustrato. Los ensayos se realizaron a 40 ° C, en tampón Tris-HCl 0,1 M (pH 8) que contenía Cys (20 mM) y 0,15, 0,3, y 6,25 mM de cada sustrato en la mezcla de reacción. P-nitrofenol fue seguido a 405 nm en un UV Cintra 6 espectrofotómetro Visible. La determinación de p-nitrofenolato producido durante la reacción, se llevó a cabo mediante una curva de calibración de p-nitrofenol (5-50 mM) en tampón 0,1 M Tris-HCl (pH 8) que contenía acetonitrilo (5% v/v). Acaciaina y granulosaina se ensayaron frente a varios ésteres de N- alfa carbobenzoxi-p-nitrofenilados de diferentes L-aminoácidos. El sustrato preferido de acaciaina fue el derivado Lys y en orden decreciente Arg, Gly, Asn. Estos resultados demostraron la alta selectividad de acaciaina por aminoácidos básicos y polares. El carácter hidrófobo de Phe, Trp, Ile y Val impidieron la expresión de la actividad proteolítica de acaciaina. La mayor preferencia de granulosaina fue expresada frente al derivado Asn, aunque mostró alta actividad y baja selectividad por aminoácidos básicos (Arg, Lys) y polares (Asn, Gly, Gln). Sin embargo, demostró baja preferencia por aminoácidos no polares (Phe, Ile, Trp, Val).