Estabilidad de antiacanthaina en sistemas bifásicos acuoso-orgánico

GRISEL BERSI; DIEGO VALLÉS; ANA CANTERA; SONIA BARBERIS

Estancia Grande, San Luis

Congreso; XXXII Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Cuyo; 2014

El uso de solventes orgánicos como medio de reacción para las reacciones de síntesis enzimática proporciona numerosas ventajas en comparación con los sistemas de reacción en medio acuoso tradicionales. En medios orgánicos, las proteasas sintetizan enlaces peptídicos debido al desplazamiento del equilibrio termodinámico en favor de la síntesis. El objetivo de este trabajo fue estudiar la estabilidad de las enzimas proteolíticas de los frutos maduros de Bromelia antiacantha Bertol., una planta que crece en Argentina, en medios orgánicos bifásicos, para su aplicación a la síntesis de péptidos bioactivos. Un diseño estadístico experimental permitió agrupar diferentes solventes orgánicos por sus características físicas y químicas, para seleccionar uno de cada grupo. La estabilidad de antiacanthaina en el sistema bifásico (Tris-HCl (0,1 M) pH 8 - solvente orgánico) se ensayó por medio de la incubación del extracto crudo pre-purificado en la mezcla de reacción (30:70; 50:50 y 70:30) durante 24h. Se tomaron muestras periódicamente y se determinó la actividad enzimática proteolítica usando N-α-benzoil-DL-arginina--nitroanilida (BApNA) como sustrato. Antiacanthaina en sistemas bifásicos formados por buffer Tris ? HCl (pH 8) y solvente orgánico al 50 % (v/v) mostró un perfil de activación respecto de su comportamiento en buffer Tris-HCl (pH 8). La actividad inicial y los perfiles de estabilidad de antiacanthaina fueron activados por (50%) acetato de etilo y hexano;mantenidos por benceno, éter etílico y diclorometano(50%) y disminuido por octano y clorobenceno (50%), cuando fueron comparados con su comportamiento en buffer. Los perfiles de estabilidad de antiacanthaina en sistemas bifásicos acuoso-orgánicos(30% y 70%) fueron mantenidos, a excepción de clorobenceno (70%).