Estudio del comportamiento de dos proteasas vegetales autóctonas para su aplicación a la biocatálisis

GABRIELA ROCHA; EVELINA QUIROGA; SONIA BARBERIS; DAVID OBREGÓN; GRACIELA FERNÁNDEZ; MÓNICA PARISI

Montevideo

Encuentro; IV Encuentro Regional de Biocatálisis y Biotransformaciones (IV EnReBB).; 2010

Red Latinoamericana de Biocatálisis y Botransformaciones

Las proteasas son un grupo de enzimas capaces de catalizar tanto la hidrólisis de proteínas como la síntesis de péptidos. Ambas actividades son muy utilizadas en la industria alimenticia y farmacéutica, ocupando una parte importante del mercado mundial de las enzimas. Las ventajas más importantes de la biocatálisis de péptidos sobre la catálisis química están dadas por la especificidad de la reacción y la reducción de los requerimientos de protección de las cadenas laterales. El objetivo de este trabajo es estudiar la hidrólisis sobre caseína bovina de dos fitoproteasas obtenidas a partir de dos plantas autóctonas de la República Argentina, salpichroína de Salpichroa origanifolia (Lam.) Baill. (Solanaceae) y araujiaína de Araujia hortorum Fourn. (Asclepiadaceae), y evaluar el efecto de distintas condiciones para su posible aplicación en la síntesis de péptidos. Se estudió la hidrólisis producida por extractos crudos de salpichroína y araujiaína sobre caseína bovina (1% p/V) durante dos horas. Las condiciones de reacción fueron las empleadas en el proceso de coagulación de la leche para la elaboración de quesos (pH 6,3 y 37° C). La cinética de hidrólisis obtenida con ambas enzimas fue similar, resultando la actividad de araujiaína levemente superior a la de salpichroína en cada medición. Se evaluaron también las preferencias (actividad esterolítica) del extracto crudo de salpichroína sobre los N-CBZ p-nitrofenil ésteres de algunos aminoácidos. La mayor hidrólisis se obtuvo sobre los derivados de triptofano, prolina y fenilalanina, y en menor medida sobre alanina, glutamina y glicina.  Además, se estudió la actividad residual del extracto crudo de salpichroína, luego de su incubación en medios acuoso-orgánicos formados por la mezcla de buffer Tris HCl (0,1 M, pH 8,5) y acetonitrilo, acetato de etilo o hexano, en relación 50:50. Al cabo de 1h de incubación en estos medios bifásicos, la enzima fue capaz de mantener una buena actividad hidrolítica, mostrando la mayor estabilidad en la mezcla de hexano:buffer. Finalmente, estos resultados fueron comparados con las actividades hidrolíticas y sintéticas de ambas enzimas inmovilizadas en diferentes soportes (araujiaína inmovilizada en glioxil agarosa a pH 9,0 y salpichroína en PEI y glioxil agarosa a pH 7,0).