Optimización de la expresión y purificación de la porina OmpC de Y. enterocolitica serotipo O:3

SILVIA DI GENARO; NATALIA CARMONA; MARIANELA LEPORATI; JAVIER ELIÇABE

Mendoza

Jornada; XXVI Jornadas de Jovenes Investigadores AUGM; 2018

Asociación de Universidades Grupo Montevideo (AUGM)

El objetivo de este trabajo fué optimizar la expresión y purificación de porina OmpC de Yersinia enterocolítica (Ye) serotipo O:3 y evaluar sus propiedades antigénicas. Para ello, transformamos bacterias de expresión con el plásmido pET-OmpC y optimizamos variables del cultivo para la sobreexpresión de la porina recombinante. Posteriormente, optimizamos la purificación de la porina, la cual se empleó para la inmunización de ratones, y estos, posteriormente, fueron desafiados con Ye por vía oral. Finalmente, se analizó la carga bacteriana en bazo, placas de Peyer y ganglio linfático mesentérico. Además, se analizó la producción de IFN-γ en sobrenadante de cultivo de células de bazo y ganglio linfático mesentérico re-estimuladas con Ye muerta por calor (HKY). Previamente, se realizaron estudios informáticos que permitieron obtener la estructura molecular y la probabilidad antigénica de la porina. Nuestros resultados demuestran que la porina OmpC puede ser sobreexpresada en E. coli BL21 (DE3) Star. Su expresión óptima necesita de cultivos con DO600 superior al 0,7, adición de 0,1% de glucosa y concentraciones de IPTG cercanas a 1 mM y en un rango de temperatura de 25 a 37 ºC. Finalmente, se purificó la proteína por cromatografía de afinidad. Además, se obtuvo la estructura molecular teórica de la porina OmpC de Ye con motivo barril β, y la probabilidad antigénica arrojó un valor de 0.75 (score máximo 1). Los ensayos de inmunización permitieron determinar que esta proteína tiene la capacidad de activar la respuesta inmune en la mucosa gastrointestinal. Este mismo resultado fue observado también a nivel sistémico. No obstante, el grado de respuesta no sería del todo eficiente al momento de controlar una infección con Ye.