Inmunosensor microfluídico electroquímico que emplea Fe2O3@AuNPs para la cuantificación de IgG anti-Toxocara canis

JOFRÉ CF; ARANDA PR; MESSINA GA; REGIART DM; PEREIRA SV; FERNÁNDEZ BALDO MA; RABA J

Santa Rosa, La Pampa

Congreso; X Congreso Argentino de Química Analítica; 2019

Universidad Nacional de La Pampa, Asociación Argentina de Químicos Analíticos

Inmunosensor microfluídico electroquímico que emplea Fe2O3@AuNPs para la cuantificación de IgG anti-Toxocara canis Jofre CF, Regiart MD, Fernández-Baldo MA, Aranda PR, Pereira SV, Raba J, Messina GA*INQUISAL, Departamento de Química, Facultad de Química, Bioquímica y Farmacia, Universidad Nacional de San Luis, Chacabuco 917, San Luis, Argentina.*e-mail: messina@unsl.edu.ar La toxocariasis es una enfermedad causada por la ingestión accidental de huevos infecciosos que eclosionan en la primera porción del intestino. Posteriormente, las etapas juveniles se distribuyen por todo el cuerpo, generando síntomas de manifestaciones de leves a severas. La posibilidad de un diagnóstico temprano es de gran importancia, ya que permite un manejo y tratamiento adecuados de los pacientes que sufren de toxocariasis1,2.En el presente trabajo se desarrolló un inmunosensor microfluídico para la determinación cuantitativa de anticuerpos IgG contra Toxocara canis (IgG anti-T). La detección se llevó a cabo utilizando un inmunoensayo no competitivo, en el que se inmovilizaron de forma covalente antígenos secretores-excretores de larvas de la segunda etapa (TES) de T. canis sobre nanopartículas bimetálicas core-shell de óxido férrico cubiertas con oro (Fe2O3@AuNPs)3. Estas nanopartículas fueron caracterizadas por microscopia electrónica de barrido (SEM), espectrometría de energía dispersiva (EDS) y voltamperometría cíclica (CV), e incrementan la sensibilidad y selectividad de la metodología4.Los anticuerpos presentes en las muestras de suero reaccionaron inmunológicamente con TES, y luego se cuantificaron utilizando un segundo anticuerpo anti-IgG marcado con enzima peroxidasa (HRP). HRP cataliza la reducción de peróxido de hidrogeno (H2O2) a agua (H2O) con la consecuente oxidación del mediador catecol (H2Q) a p-benzoquinona (Q). La posterior reducción electroquímica de Q a H2Q es detectada sobre la superficie del electrodo de trabajo, el cual fue elaborado por sputtering en el sistema microfluídico. La corriente obtenida como respuesta es directamente proporcional a la actividad de la enzima y consecuentemente a la concentración de IgG anti-T presente en la muestra. El tiempo total del ensayo fue de 20 minutos, habiendo realizado la detección electroquímica en menos de 1 minuto. El límite de detección calculado para la metodología propuesta fue de 0.10 ng mL−1 y los coeficientes de variación intra- e inter- ensayo fueron menores al 6%. Los resultados muestran la utilidad del inmunosensor desarrollado para la determinación rápida de anticuerpos IgG anti-T de perro.1 M. Wisniewska-Ligier, T. Wozniakowska-Gesicka, J. Sobolewska-Dryjanska, A. Markiewicz?Jozwiak, M. Wieczorek, , Parasitol. Res. 110 (2012) 2363?2371.2 K. Mazur-Melewska, A. Mania, M. Figlerowicz, P. Kemnitz, W. Sluzewski, M. Michalak, Ann. Agric. Environ. Med. 19 (2012) 233?236.3 W. Roldán, W. Cornejo, Y. Espinoza, Mem. Inst. Oswaldo Cruz 101 (2006) 71?74.4 F. Lan, G. Sun, L. Liang, S. Ge, M. Yan, J. Yu, Biosens. Bioelectron. 79 (2016) 416?422.