INMOBILIZACION DE PEROXIDASA SOBRE UN ELECTRODO DE ORO MODIFICADO CON PENICILAMINA APLICADO EN LA DETERMINACIÓN DE METIMAZOL

SIRLEY V. PEREIRA; NOELIA A. MARTÍNEZ; MARIA I. SANZ; JULIO RABA; GERMÁN A. MESSINA

Bahia Blanca

Congreso; Congreso Argentino de Química Anaítica; 2009

Asociación de Químicos Analíticos

INMOBILIZACION DE PEROXIDASA SOBRE UN ELECTRODO DE ORO MODIFICADO CON PENICILAMINA APLICADO EN LA DETERMINACIÓN DE METIMAZOL Sirley V. Pereira, Noelia A. Martínez, Maria I. Sanz, Julio Raba, Germán A. Messina. INQUISAL, Departamento de Química, Facultad de Química, Bioquímica y Farmacia, Universidad Nacional de San Luis, Chacabuco y Pedernera 5700, San Luis, Argentina. E-mail: spereira@unsl.edu.ar En este trabajo se describe la inmovilización de la enzima peroxidasa (HRP) sobre la superficie de un electrodo de oro modificado con penicilamina (PA) y su aplicación en la determinación de metimazol (MT) en formulaciones farmacéuticas. En la primera etapa de inmovilización, el electrodo (previamente acondicionado), fue sumergido en una solución de penicilamina (PA) 250mM durante 12hs, luego fue enjuagado con etanol y posteriormente secado con N2 gaseoso. En esta etapa PA se unió covalentemente a la superficie del electrodo por medio de sus grupos tioles formando una monocapa. Seguidamente el electrodo unido a PA fue colocado en una solución de carbodimida-succinimida EDC: NHS (EDC 1% (v/v), NHS 2,5% (v/v). En esta fase intermedia se produce la activación de los grupos carboxilos de la PA, para su posterior unión covalente a los grupos amino de la enzima. Finalmente sobre la superficie modificada del electrodo se agregaron 20µL de una solución 0,25 mg mL−1 de HRP en buffer fosfato, pH 7,40 durante toda un anoche a 4◦C [1,2]. El electrodo modificado se introdujo mas tarde en una celda de flujo, donde HRP catalizó la reducción de  peróxido de hidrogeno (H2O2)  a agua (H2O) con la consecuente oxidación del mediador catecol (H2Q) a p-benzoquinona (Q). La posterior reducción electroquímica de Q a H2Q es detectada sobre la superficie del electrodo de trabajo. La corriente obtenida como respuesta es directamente proporcional a la actividad de la enzima y consecuentemente a la concentración de H2O2 adicionada al sistema [3]. Cuando MT es añadido a la solución, el grupo tiol de este compuesto participa en una reacción de adición tipo Michael con Q para formar el correspondiente derivado tioquinónico, disminuyendo la corriente de reducción en forma proporcional al incremento de la concentración de MT adicionada [4]. REFERENCIAS [1] Mena M.L., Yañez-Sedeño P., Pingarrón J.M., Analytical Biochemistry 336 (2005) 20. [2] Matheus P. R., Abad J. M., Fernández V. M., Rev. Téc. Ing. Univ. Zulia 30 (2007) 225. [3]Messina G. A., Torriero A., De Vito I. E., Olsina R. A., Raba J., Analytical Biochemistry 337 (2005) 195. [4]Martinez N. A., Messina G. A., Bertolino F. A., Salinas E., Raba J.,Sensors and Actuators B 133 (2008) 256.