OPTIMIZACIÓN POR CALIBRACIÓN MULTIVARIADA DE HIDROLISIS ACIDA POR MICROONDAS DE PROTEÍNAS, APLICADA A LA DETERMINACIÓN DE SELENOAMINOÁCIDOS EN MUESTRAS DE LECHE OVINA

LOPEZ, ROMINA; PACHECO PABLO; E. CERUTTI; ESCUDERO, L. A.

Rio Iv

Congreso; 9vo Congreso de Química Analítica; 2018

Universidad Nacional de Río Cuarto

El Selenio es un elemento traza esencial en la dieta humana. Tiene un papel relevante en larespuesta inmunológica como agente antioxidante, retrasando la posibilidad de contraer cáncer. Elselenio forma parte de los conocidos Se-aminoácidos, constituyentes de Se-proteínas con funcionesenzimáticas. Para el análisis cuantitativo de dichos aminoácidos, se utiliza la cromatografía líquidade alta performance acoplado a espectrometría de masas (LC-ICP MS). Sin embargo previo análisisde los mismos, es necesaria la hidrólisis proteica. Durante este proceso, trabajar con condicionesmuy enérgicas, puede derivar en la oxidación los Se-aminoácidos. Por este motivo se adicionaDitiotreitol (DTT), un potente agente reductor que evita la oxidación de los mismos. Por otro lado,condiciones muy suaves, pueden conducir a una liberación no cuantitativa de los mismos. Acordea lo mencionado, es necesario establecer condiciones óptimas de hidrólisis de proteínas para elanálisis de Se-aminoácidos.El presente estudio propone la determinación de Se-aminoácidos en muestras de leche ovina,mediante la hidrolisis acida de proteínas asistida por microondas y posterior determinación por LCICPMS. Mediante un diseño central compuesto se evaluaron las siguientes variables: concentracióndel ácido, concentración del antioxidante (DTT), el tiempo de digestión y potencia de microondas.Mediante la aplicación de diseño factorial se determinó que tanto la concentración del ácido comola de antioxidante son variables significativas en la hidrólisis, como así también la potencia demicroondas. Estas variables resultaron ser las más influyentes en el sistema. Finalmente, laoptimización a partir de un diseño central compuesto indicó que los valores óptimos de los mismosson: 558uL de ácido clorhídrico al 35%, 356 watt de potencia microonda y 10,14uL de DTT, paraconcentraciones de azufre entre 152,85 y 156,39 ppm, siendo el azufre un indicador de laconcentración de proteínas. Esta optimización permitió disminuir el tiempo de análisis y el volumende reactivos. La metodología propuesta alcanza una precisión de 7.8%. El límite de detección (DL)corresponde a 0,53 ug/L y el límite de cuantificación (LQ) a 1,59 ug/L. El método se aplicó a ladeterminación de Se-aminoácidos en muestras de leche ovina. Las concentraciones halladasvariaron en el siguiente rango de concentraciones: 5,21-17,59 μg/L de Se-cisteína. Se-Metil-Secisteínay Se-metionina no fueron detectados en estas muestras con el procedimiento propuesto.