Nanocompósito a base de polímeros y grafeno en un sensor electroquímico para el diagnóstico de toxoplasmosis

CLAUDIO JOFRÉ; SIRLEY V. PEREIRA; ANDRÉS TAKARA; MARTÍN A. FERNÁNDEZ BALDO; GERMÁN A. MESSINA; MARÍA SCALA BENUZZI; JULIO RABA

Río Cuarto

Congreso; IX Congreso Argentino de Química Analítica; 2017

Asociación Argentina de Químicos Analíticos y Universidad Nacional de Río Cuarto

La Toxoplasmosis es una zoonosis, causada por Toxoplasma gondii, un protozoo parásito intracelular obligado de distribución mundial [1]. Los humanos pueden adquirir la infección por ingestión de ooquistes desde las heces de gato o por ingestión de carne infectada o bien por infección intrauterina, transfusión o trasplante [1,2]. Esta enfermedad puede ser grave en inmunodeprimidos o en la infección congénita. En mujeres infectadas durante el primer trimestre del embarazo puede dar lugar a aborto espontáneo o provocar en el feto hidrocefalia [1]. El objetivo de este trabajo fue el desarrollo de un electrodo que incorpora nanocompósitos para la determinación cuantitativa de anticuerpos IgG específicos anti-T-gondii.La modificación del electrodo de láminas impresas se llevó a cabo adicionando 4 µL de una solución de óxido de grafeno (GO) 0,6 mg mL-1 y los polímeros PVP y PVA al 0,01% y 0,0075% en agua destilada, dejándose secar a 37 ºC durante 30 min. Posteriormente se realizó la reducción electroquímica de la película GO/PVP/PVA a -1,2 V en 0,5 M de NaNO3 por un periodo de 30 min. El electrodo modificado fue caracterizado morfológica, química y electroquímicamente, mediante SEM, FTIR, VC. Las imágenes SEM demostraron una excelente dispersión de GO en la mezcla polimérica y un tamaño de partícula uniforme. Para llevar a cabo la determinación de anticuerpos anti-T-gondii, antígenos de T-gondii fueron inmovilizados covalentemente sobre película GO/PVP/PVA mediante la adición de glutaraldehído. El electrodo modificado fue expuesto a muestras suero conteniendo anticuerpos IgG anti-T-gondii, los cuales reaccionaron inmunológicamente con los antígenos inmovilizados. Finalmente, los anticuerpos unidos fueron cuantificados mediante la adición de anticuerpos secundarios anti-IgG marcados con la enzima peroxidasa del rábano picante, la cual, en presencia de peróxido de hidrógeno, cataliza la oxidación de 4-ter-butil-catecol a 4-terbutil-ortoquinona. Esta última fue reducida electroquímicamente en la superficie del electrodo modificado a -0,15 V. La corriente medida fue directamente proporcional a la concentración de anti-T-gondii presente en la muestra del paciente. El límite de detección obtenido para nuestro dispositivo fue 1,1 x10-4 U mL-1. Los coeficientes de variación fueron inferiores al 5,4% para los ensayos intra-día, e inferiores al 7,1% para los ensayos inter-día. El sensor diseñado demostró ser una herramienta sensible y de fácil aplicación para el diagnóstico clínico de toxoplasmosis.