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Introducción: La patulina es una micotoxina producida por hongos de los géneros Penicillium y Aspergillus, entre los que se encuentra incluido el P. expansum (principal causante de podredumbre en frutas de pepita). Posee alta toxicidad, presentando carácter hepatotóxico, nefrotóxico,teratogénico e inmunotóxico. Ésta toxina puede detectarse en frutas, hortalizas, cereales enmohecidos y piensos, y no puede excluirse su presencia en las frutas aparentemente sanas. El método oficial (AOAC) de extracción implica un gasto de 95 mL de acetato de etilo, luego el extracto es secado con Na 2 SO 4 anhidro, evaporado y por último cuantificado por LC con detección UV, lo que conlleva a una pérdida importante de tiempo. El objetivo del presente trabajo fue desarrollar una metodología sensible y selectiva para la detección de patulina en medios de cultivo sólidos para la detección de cepas productoras de la micotoxina. Resultados: En el presente trabajo se desarrolló una metodología basada en cromatografía líquida de ultra elevada eficiencia (UHPLC) acoplada a una fuente de ionización por electrospray, en modo de polaridad negativo, con detección por espectrometría de masas en tándem (MS/MS) para el análisis de patulina en agar papa glucosado. Se utilizaron cápsulas de vidrio de 24 mm donde se colocó el medio de cultivo conteniendo patulina en concentraciones conocidas y crecientes. El tratamiento de la muestra consistió en una extracción sólido?líquido asistida por ultrasonido, seguido de centrifugación. Se estudiaron y analizaron las variables de extracción, como volumen de muestra, volumen de solvente extractante, tiempo de ultrasonido, evaluándose el efecto matriz sobre la respuesta del analito; mediante un diseño factorial completo de tres niveles (2 3 ). La separación cromatográfica se realizó con una columna de fase reversa C8, empleando elución en gradiente, siendo el tiempo necesario total de corrida de 3 min. Los resultados obtenidos demostraron porcentajes de recuperación de la toxina entre 70% y 90% y límites de detección en el orden de los unos pocos ng L -1 . Asimismo, respecto de la metodología oficial, se alcanzaron extracciones satisfactorias con una importante disminución del volumen de agente extractante y de la muestra del 91 % y el 87,5 %; respectivamente. Conclusión: Se desarrolló una metodología confiable y amigable con el ambiente que brindó rapidez, sensibilidad y selectividad en la detección de patulina, como así también posibilitó la disminución de muestra y solventes empleados, mejorando de este modo los costos y el tiempo de análisis necesario. Referencias:B. Andersen, J. Smedsgaard, J. Frisvad, Agric. Food Chem. (2004)52:2421-2428. E. Beltrán, M. Ibañez, F. Hernández, Food Chem.142 (2014)400-407.