SENSOR BIOANALÍTICO BASADO EN PAPEL, APLICADO EN EL SCREENING NEONATAL DE FENILCETONURIA

MESSINA GERMÁN; MARIN BARROSO EVELYN; BERTOLINO FRANCO; RABA JULIO; MOREIRA CRISTIAN

Congreso; 9 Congreso Argentino Química Analítica; 2017

La fenilcetonuria (PKU) es una alteración metabólica hereditaria, caracterizada por la disminución odeficiencia de la actividad de la enzima fenilalanina hidroxilasa, que cataliza la conversión defenilalanina (Phe) a tirosina. Como consecuencia Phe se acumula en la sangre del neonato,disminuyendo la síntesis de proteínas y neurotransmisores en el sistema nervioso central,generando retraso mental irreversible. En consecuencia, es necesario el desarrollo de dispositivosde análisis que permitan el diagnóstico precoz de esta patología para establecer un tratamientoadecuado en los primeros días de vida del recién nacido. Se desarrolló un dispositivo analítico depapel (PAD) acoplado a detección LIF (FPAD), para la cuantificación rápida y sensible defenilalanina (Phe) en muestras neonatales. Para incrementar la sensibilidad del dispositivo lasenzimas fenilalanina deshidrogenasa (PheDH) y diaforaza fueron inmovilizadas sobre unamicrozona de papel; la cual fue previamente modificada con nanopartículas de óxido de zinc (ZnONPS)recubiertas con quitosano. Para llevar a cabo la detección, se realizó la extracción de Phe demanchas de sangre entera, colectada sobre papel de filtro. Posteriormente el eluido se depositó,junto con el cofactor enzimático NAD+ y resazurina, sobre el FPAD. La PheDH convierte Phe y NAD+en fenilpiruvato y NADH respectivamente. Este último fue oxidado por la diaforasa con laconsecuente reducción de resazurina a resorufina fluorescente, la cual fue detectada mediante LIFutilizando una longitud de onda de excitación de 535 nm y de emisión de 580 nm (Fig. 1). Para elmétodo propuesto se obtuvieron coeficientes de variación intra e inter-ensayo menores a 5% y 6.5%,respectivamente. Los límites de detección para el método propuesto y el método de referenciacomercial fueron 125 nM y 18 µM de Phe respectivamente, obteniéndose una correlación entreambos métodos cercana a la unidad. El método propuesto permitió la detección simple, rápida ysensible de Phe en muestras reales.