DESARROLLO DE UN INMUNOSENSOR PARA LA CUANTIFICACIÓN DE ANTICUERPOS IgG ANTI-GLIADINA EN MUESTRAS DE SUERO DE PACIENTES CELÍACOS

SIRLEY V. PEREIRA; MARCO A. SEIA; RABA J.; GERMÁN A. MESSINA

Bahía Blanca

Congreso; Congreso Argentino de Química Analítica; 2009

Asociación Argentina de Químicos Analíticos

DESARROLLO DE UN INMUNOSENSOR PARA LA CUANTIFICACIÓN DE ANTICUERPOS IgG ANTI-GLIADINA EN MUESTRAS DE SUERO DE PACIENTES CELÍACOS Sirley V. Pereira, Marco A. Seia, Julio Raba, Germán A. Messina INQUISAL, Departamento de Química, Facultad de Química, Bioquímica y Farmacia, Universidad Nacional de San Luis, Chacabuco y Pedernera 5700, San Luis, Argentina. E-mail: spereira@unsl.edu.ar El propósito de este trabajo fue desarrollar un inmunosensor para la cuantificación de anticuerpos anti-gliadina (AGAs) de tipo IgG, la detección de estos anticuerpos constituye parte del diagnóstico de la enfermedad celíaca. La enfermedad celíaca es una patología autoinmune generada por la exposición a proteínas del gluten [1], se caracterizada por la inflamación y atrofia vellositaria intestinal desencadenadas luego de la ingesta de proteínas del gluten provenientes de cereales como: trigo, centeno y cebada [2]. Uno de los procedimientos utilizados para el diagnóstico de la enfermedad celíaca consiste en la detección de anticuerpos específicos contra gliadinas (prolaminas presentes en trigo) en muestras de suero humano [3,4]. Para tal fin, se desarrolló un sensor donde la cuantificación de anticuerpos anti-gliadinas de tipo IgG se llevó a cabo empleando los principios del inmunoensayo sumados a la detección electroquímica. Dicho sensor cuenta con un cuerpo principal construido de plexiglas, el mismo contiene un disco rotatorio (parte inferior) y el sistema de detección, que consta de un electrodo de carbono vítreo (GCE como parte superior del reactor). Los antígenos fueron inmovilizados sobre la superficie del disco rotatorio, y posteriormente fueron reconocidos por los anticuerpos anti-gliadina presentes en muestras de suero humano, dichos anticuerpos fueron finalmente cuantificados por la acción de la enzima fosfatasa alcalina (FA) unida al anticuerpo secundario. El sustrato de la enzima AP: p-aminofenolfosfato (p-APP) fue transformado en p-aminofenol (p-AP) y este producto fue finalmente detectado en la superficie del electrodo de trabajo a 0,250V. La corriente que se obtuvo como respuesta a la presencia del producto de la reacción enzimática fue directamente proporcional a la actividad enzimática y consecuentemente a la concentración de anticuerpos de tipo IgG en muestras de suero humano. REFERENCIAS [1] Collin P., Reunala T., Mäki M., 1997. New diagnostic strategy for coeliac disease. In: Mäki, M., Collin P., Visakorpi J.K. (Eds.), Coeliac Disease: Proceedings of the Seventh International Symposium on Coeliac Disease. Vammalan kirjapaino Oy, Vammala, pp. 47–51. [ 2] Shewry P.R., Tatham A.S., 1999. The characteristics, structures and evolutionary relationships of prolamins. In: Shewry P.R., Casey R. (Eds.), Seed Proteins. Kluwer Academic Publishers, Dorfrecht, pp. 11. [3] K. Rijal, A. Leung, P. Mohana Shankar, R. Mutharasan, Biosens. Bioelectron. 21 (2005) 871. [4] Min Li, Yu-Cheng Lin, Kai-Chun Su, Yu-Tsung Wang, Chain Chang Tsung, Hong-Ping Lin, Sens. Actuators B 117 (2006) 451.