MAGNETO- INMUNOSENSOR MICROFLUIDICO PARA LA CUANTIFICACIÓN DE ANTICUERPOS Ig-G ANTI-HELICOBACTER PYLORI EN MUESTRAS DE SUERO HUMANO

SIRLEY V. PEREIRA; MARCO A. SEIA; JULIO RABA; GERMÁN A. MESSINA

Bahia Blanca

Congreso; Congreso Argentino de Quimica Analitica; 2009

Asociación Argentiona de Químicos Anaíticos

MAGNETO- INMUNOSENSOR MICROFLUIDICO PARA LA CUANTIFICACIÓN DE ANTICUERPOS Ig-G ANTI-HELICOBACTER PYLORI EN MUESTRAS DE SUERO HUMANO Sirley V. Pereira, Marcos A. Seia, Julio Raba, Germán A. Messina INQUISAL, Departamento de Química, Facultad de Química, Bioquímica y Farmacia, Universidad Nacional de San Luis, Chacabuco y Pedernera 5700, San Luis, Argentina. E-mail: spereira@unsl.edu.ar En este trabajo se describe el desarrollo de un magneto-inmunosensor microfluídico [1-4] acoplado a un electrodo de oro para la cuantificación rápida y sensible de anticuerpos IgG anti-helicobacter pylori en muestras de suero humano. Este microorganismo es uno de los agentes causales de úlcera péptica y gastritis crónica, estas patologías son consideradas factores de riesgo para el desarrollo de cáncer gástrico, el cual ocupa el segundo lugar entre las causas de muerte por cáncer en todo el mundo [6]. El sensor se automatizó completamente y la detección de anticuerpos en muestras de suero fue llevada a cabo empleando un inmunoensayo no competitivo [7] en el cual los antígenos purificados de H. pylori fueron inmovilizados sobre partículas magnéticas 3-aminopropilo-modificadas. Dichas partículas se inyectaron dentro del microcanal central del dispositivo y se manipularon por la acción del campo magnético generado por un imán externo removible [8]. Posteriormente los anticuerpos presentes en muestras de suero humano reaccionaron inmunológicamente con los antígenos inmovilizados, estos anticuerpos fueron cuantificados utilizando un segundo anticuerpo marcado con la enzima fosfatasa alcalina (AP). p-aminofenolfosfato (p-APP) fue transformado en p-aminofenol (p-AP) por la acción de AP y fue detectado sobre una película de oro (electrodo de trabajo) a 0.250V. La corriente obtenida como respuesta de la oxidación del producto de la reacción enzimática fue directamente proporcional a la actividad enzimática y consecuentemente a la concentración de anticuerpos de tipo IgG en muestras de suero. La detección electroquímica se realizó dentro de 1 minuto y el tiempo total del ensayo fue de 25 minutos [9]. Los límites de detección calculados para la detección electroquímica y el procedimiento de ELISA fueron de 0.37 y 2.1 UmL-1, respectivamente, y los coeficientes de variación intra e inter ensayo fueron menores al 5%. Los resultados obtenidos revelan la potencial utilidad de nuestro microbiochip para la rápida determinación de anticuerpos de tipo IgG anti H. pylori. REFERENCIAS [1] Whitesides G.M., Nature 442 (2006) 368. [2] Yager P., Edwards T., Fu E., Helton K., Nelson K., Tam M.R., Weigl B.H., Nature 442 (2006) 412. [3] Janasek D., Franzke J., Manz A., Nature 442 (2006) 374. [4] Dittrich P.S., Tachikawa K., Manz A., Anal. Chem. 78 (2006) 3887. [5] Goodman K.J., Cockburn M., Epidemiology 12 (2001) 266. [6] Stacy A.R.  , Bell G.D., Newell D.G., in: G. Gasbarrini, S. Petrolani (Eds.), Basic and Clinical Aspects of Helicobacter pylori Infection, Springer, Berlin, 1998, p. 159. [7] Johns M.A., Rosengarten L.K., Jackson M., Regnier F.E., J. Chromatogr. A 743 (1996) 195. [8] Messina G. A., De Vito I.E., Raba J., Sensors and Actuators B 128 (2007) 23.