Naturaleza de metabolitos secundarios con actividad antimicrobiana producido por B. atrophaeus

GARAY L; DELFINI, CD; VILLEGAS LB; PALAZZOLO M

Rosario

Congreso; ALAM 2016; 2016

Asociacion Latinoamericana de Microbiología

El control biológico es un método que emplea organismos vivos para reducir la densidad de la población de otros organismos plaga. Esta técnica no sólo comprende la utilización de organismos antagonistas sino también de sus metabolito contribuyendo a la disminución del uso de pesticidas químicos.Recientemente, nuestro grupo de trabajo aisló a partir de guano de murciélago una bacteria identificada como Bacillus atrophaeus. Esta bacteria mostró capacidad de inhibir hongos fitopatógenos.El objetivo de este trabajo fue analizar la capacidad inhibitoria de B. atrophaeus sobre hongos fitopatógenos y bacterias enteropatógenas, así como evaluar la naturaleza de los metabolitos antimicrobianos producidos. Para alcanzar los objetivos se trabajó con los sobrenadantes de cultivo de B. atrophaeus obtenidos en medio líquido nutritivo (en g L-1: triptona 15; extracto de levadura 3; NaCl 6; glucosa 1). Los cultivos se incubaron durante 120h a 30ºC y 200 rpm. Los cultivos fueron filtrados utilizando filtros de 0,2µ (milipore) para obtener el sobrenadante libre de células.Los ensayos de inhibición microbiana se realizaron sobre placas de Petri en medios agarizados. Para el desarrollo de los hongos se utilizó medio papa glucosada y para las bacterias tripteina soja. El sobrenadante libre de célula de B. atrophaeus fue colocado sobre pocillos ubicados en el centro de cada placa. Las placas fueron incubadas a 30ºC hasta el completo desarrollo de los microorganismos sembrados. La actividad antimicrobiana se evidenció por la formación de zonas claras en torno de pocillo sin desarrollo microbiano.Para analizar la naturaleza de los metabolitos involucrados se realizó un ensayo también sobre placas de Petri, para lo cual al sobrenadante se le efectuó una extracción con butanol obteniéndose 2 fracciones, una butanólica y otra acuosa, ambas fueron colocadas sobre pocillos en el centro de las placas sembradas con los microorganismos sensibles y posteriormente cultivadas a 30ºC.Por otro lado se realizó cromatografía en capa fina con el sobrenadante de cultivo de B. atrophaeus, utilizándose como fase móvil BAW (butanol: ácido acético: agua) y como revelador ninhidrina, específico para aminoácidos y violeta de genciana específico para lípidos.La actividad antimicrobiana fue efectiva para la inhibición de un gran número de hongos fitopatógenos, no así contra bacterias enteropatógenas. Se confirmó que la actividad antifúngica se encuentra en la fracción butanólica de los sobrenadantes libre de célula de B. atrophaeus. Los resultados de las técnicas empleadas para estimar la naturaleza de los metabolitos antimicrobianos indicarían que el responsable de esta actividad sería un antibiótico lipídico, probablemente lipopéptidos perteneciente a la familia de las iturrinas, informadas como metabolitos antifúngicos producidos por otras bacterias del género Bacillus. Se espera a futuro identificar este metabolito y optimizar su producción para estrategias de biocontrol.