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Los herbicidas de la familia de las sulfonilureas se introdujeron en la década del 80, siendo el Clorsulfurón (CS) el primer herbicida comercial de este grupo. CS se utiliza para controlar una gran variedad de malezas de hoja ancha, aplicándose de forma preemergente en cultivos de trigo o postemergencia en cebada, lino, avena, trigo y triticale. El mayor inconveniente radica en que sus residuos se pueden encontrar en las fuentes de agua potencialmente empleadas para el consumo humano y animal. Por esta razón, es importante desarrollar métodos rápidos y simples para determinar los residuos de sulfonilureas en niveles trazas.Las legislaciones de EE.UU. y de la Unión Europea (UE) han establecido niveles máximos de concentración de herbicidas de 0,1 mg L-1 para los compuestos individuales y de 0,5 mg L-1 de herbicidas totales en agua potable. La legislación argentina sólo establece un nivel máximo de 100 g L-1 para la totalidad de los plaguicidas. La fluorescencia molecular es una técnica instrumental muy sensible, que permite determinar analitos de diferente naturaleza en concentraciones en el orden de los vestigios. Asimismo, posee un elevado intervalo de linealidad y una adecuada selectividad, ya que un número relativamente limitado de sistemas químicos presentan propiedades fluorescentes. El presente trabajo tuvo como objetivo desarrollar una metodología alternativa a las técnicas tradicionales de análisis para el monitoreo de CS en muestras de diversa naturaleza, utilizando instrumental accesible en laboratorios de control. Los parámetros analíticos que afectan la etapa determinativa fueron optimizados. Posteriormente se evaluó la versatilidad de la metodología aplicándola a la determinación de CS en muestras de agua y fluidos biológicos.