INQUISAL 20936
INSTITUTO DE QUIMICA DE SAN LUIS "DR. ROBERTO ANTONIO OLSINA"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Desarrollo de una inmuno-columna aplicada en la determinación de anticuerpos IgG específicos para Helicobacter pylori en muestras de suero humano
Autor/es:
MARTÍN FERNANDEZ BALDO; SIRLEY V. PEREIRA; FRANCO A. BERTOLINO; PATRICIA WANDA STEGE; ELOY SALINAS; JULIO RABA; GERMÁN ALEJANDRO MESSINA; MARIA I. SANZ
Lugar:
San Miguel de Tucumán
Reunión:
Congreso; XXVII Congreso Argentino de Química,; 2008
Resumen:
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Helicobacter pylori es
un bacilo patógeno Gram negativo adaptado para colonizar la mucosa gástrica
humana, infectando más de la mitad de
la población global causando: úlcera péptica y gastritis crónica [1] y
clasificado como carcinógeno de clase I. La
enfermedad puede ser curada por erradicación de H. pylori a través de la
aplicación de una triple terapia, compuesta por un inhibidor de la bomba de
protones y dos o en algunos casos tres antibióticos (claritromicina,
metronidazol y amoxicilina) [2]. Para prevenir el indiscriminado uso de
múltiples antibióticos, teniendo en cuenta el alto grado de resistencia al
tratamiento, es necesario un diagnostico preciso de la infección por este
microorganismo. Los métodos
disponibles para diagnosticar la infección por H. pylori pueden
dividirse en: invasivos y no invasivos [3]. Los invasivos utilizan endoscopia para obtener una muestra de biopsia
estomacal, la cual es analizada histológicamente y por cultivo en medios
selectivos, para demostrar la presencia de H. pylori. De forma
alternativa, el test de ureasa positivo realizado sobre la muestra de biopsia
indica la presencia de H. pylori, debido a que éste produce gran
cantidad de esta enzima [4]. Entre los no invasivos se encuentran la
prueba del aliento de urea y los métodos serológicos.
La
metodología mayormente utilizada en la detección de anticuerpos para H. pylori es la técnica de ELISA (enzyme-linked
immunosorbent assay) [5]. A pesar de que ésta es utilizada en la exámen clínico
de rutina, su límite de detección es relativamente pobre cuando el sistema de
detección utilizado es espectrofotométrico, siendo la causa de pérdida de
sensibilidad [6]. Los enzimo inmunoensayos heterogéneos acoplados a un sistema
de inyección en flujo y detección amperométrica son una poderosa herramienta
analítica para la determinación de bajos niveles de analitos, tales como
anticuerpos, hormonas, drogas, marcadores tumorales y virus [7].Los métodos
electroquímicos ofrecen excelente sensibilidad, rapidez, y la característica de
combinar instrumentación simple y bajo costo [8].
Este
trabajo muestra el desarrollo de un método de cuantificación de anticuerpos IgG en suero humano para H. pylori basado en el múltiple uso de
un antígeno de H. pylori inmobilizado sobre una columna inmunocromatográfica incorporada
dentro de un sistema analítico de inyección de flujo (FI).Los anticuerpos en la
muestra de suero son detectados por reacción inmunológica con el antígeno de H.
pylori inmobilizado, y cuantificados por un segundo anticuerpo específico para
IgG humana conjugado con la enzima fosfatasa alcalina (AP).
p-Aminofenil-fosfato (PAPP) fue convertido a p-amino-fenol (pAF) por la acción
de fosfatasa alcalina y el producto electroactivo fue cuantificado sobre un
electrodo de carbono vítreo modificado con nanotubos de carbono a 0,30 V. La
corriente obtenida por oxidación del producto enzimático es proporcional a la
actividad de la enzima y consecuentemente a la concentración de anticuerpo
unido a la columna inmunocromatográfica
