“Método simple y rápido para el control de calidad de nafazolina en línea por espectrofluorimetría exaltada por micelas”.

CECILIA M. PERALTA; LILIANA P. FERNÁNDEZ; ADRIANA N. MASI

Tucumán, Argentina

Congreso; XXVII Congreso Argentino de Química Dr. Pedro José Aymonino; 2008

MÉTODO SIMPLE Y RÁPIDO PARA EL CONTROL DE CALIDAD DE NAFAZOLINA EN LÍNEA POR ESPECTROFLUORIMETRÍA EXALTADA POR MICELAS Cecilia M. Peralta3, Liliana P. Fernández1,3, Adriana N. Masi*2,3, 1 Área de Química Analítica. 2Área de Bromatología- Ensayo y Valoración de Medicamentos. Facultad de Química, Bioquímica y Farmacia. Universidad Nacional de San Luis. 3 INQUISAL(CONICET). Chacabuco y Pedernera. 5700 - San Luis. ARGENTINA. E-mail: cperalta@unsl.edu.ar 1. Introducción La Nafazolina (NFZ) es un agente simpático mimético con marcada actividad alfa adrenérgica. Actúa sobre los receptores alfa de la mucosa nasal produciendo vasoconstricción de los vasos capilares, dando como resultado una reducción del flujo sanguíneo y la congestión de la mucosa. Es el principio activo en algunas gotas comerciales nasales y oftálmicas. Es ampliamente usado para aliviar el enrojecimiento propio de la irritación del ojo causado por frío, viento, polvo, smog, polen, natación o uso de lentes de contacto [1]. La mayoría de los métodos propuestos para determinar NFZ son fotométricos [2, 3] y cromatográficos[4-7]. Electroforesis capilar [8-10], absorción atómica [11] y métodos de emisión también han sido publicados. Nafazolina presenta fluorescencia intrínseca y emisión fosforescente. Diferentes métodos luminiscentes han sido desarrollados para su determinación [12-15]. Todos ellos presentan complicaciones de rutina en el laboratorio como procedimientos tediosos y largos. Los métodos fotométricos no son selectivos ni suficientemente sensibles, los métodos separativos son costosos y requieren mucho tiempo. Los métodos luminiscentes propuestos se realizan en batch y requieren el trabajo de un analista entrenado [16]. Los controles de calidad de rutina involucran el análisis de una cantidad considerable de muestras con el propósito de asegurar el cumplimiento de las formulaciones dentro de los límites establecidos por las normas internacionales. El método propuesto se basa en una combinación de análisis por inyección en flujo (FIA) con detección fluorescente exaltada por micelas como una poderosa alternativa para el rápido y sensible análisis de nafazolina. 2. Metodología Un sistema FIA fue usado para la determinación en línea de NFZ. El manifold fue construído usando una bomba peristáltica Gilson Minipuls-3 de cuatro canales con selector de velocidad; una válvula de inyección de 6 puertos y tubos de PVC de 0.8 mm d. i. Bajo las condiciones descriptas en la Tabla 1, un flujo de SDS/bórax/NaCl produce la línea base. Después de cambios de posición de la válvula NFZ es mezclada en el espiral de reacción con la corriente SDS/bórax/NaCl (para obtener las condiciones óptimas para la emisión fluorescente de NFZ) e impulsada luego a través del espectrofluorímetro para medirla. Para validar el método, NFZ fue determinada aplicando el método de adición estándar. Este procedimiento fue aplicado para la determinación de NFZ en cuatro muestras, tres de gotas oftálmicas y una nasal de clorhidrato de NFZ. 3. Resultados Características fluorescentes de nafazolina en medio acuoso La droga muestra una emisión máxima a 326 nm cuando es exitada a 280 nm. Esta longitud de onda fue seleccionada para los siguientes ensayos para las medidas de intensidad fluorescente. Tabla 1: Características del sistema FIA para la determinación de NFZ Parámetro                                           Condición óptima pH                                                       9 Fuerza iónica (mol.L-1)                          0.1 Concentración de SDS (mol.L-1)             8,1.10-3 LD (mol.L-1)                                         1,23 10-9 LC (mol.L-1)                                         1,23 10-8 Velocidad de flujo (rpm)                         20 Nafazolina muestra una fuerte señal fluorescente nativa a pH alcalinos, pero mostró una disminución en la emisión fluorescente a pH extremadamente ácidos. Los análisis de datos espectrofluorimétricos para NFZ en agua muestran una máxima intensidad entre pH 8-9, y vuelve a decrecer a pH más altos que 9,8. El pH de trabajo seleccionado fue 9 debido a la mayor intensidad obtenida y a la posibilidad de usar una solución de buffer (Bórax) que no interfiere con las medidas fluorescentes. Naturaleza y concentración de agente surfactante Con el objetivo de mejorar la emisión luminiscente, las propiedades de NFZ en varios medios surfactantes fueron estudiadas: surfactante aniónico (SDS, 0 - 9 10-3 mol L-1), catiónico (HTAB, 9 10-3 mol L-1) y no-iónico (PONPE 7.5, 8,5 10-5 mol L-1). Los datos experimentales mostraron que el factor de incremento para el sistema NFZ-SDS (2.2 veces respecto a fluorescencia de NFZ en medio acuoso) fue mayor que NFZ-HTAB; para PONPE 7.5, un importante espectro interferente fue observado; por lo tanto, el surfactante aniónico SDS fue elegido para posteriores determinaciones. Efecto de la velocidad de flujo La señal fluorescente es más alta para 20 rpm, desde 25 rpm una gran turbulencia fue observada por la introducción de burbujas dentro del sistema FIA, la velocidad seleccionada fue 20 rpm. Efecto de electrolitos sobre la señal fluorescente de NFZ En medio surfactante acuoso, el rol del NaCl es ayudar a introducir al compuesto orgánico dentro del interior de la micela. En este trabajo se ha encontrado que en presencia de 0.1 mol L-1 de NaCl, la fluorescencia de NFZ en medio surfactante incrementa al menos 2.5 veces que el mismo en ausencia de la sal. Linealidad y sensibilidad La ecuación del gráfico de calibración fue obtenido por análisis de regresión lineal por mínimos cuadrados de las áreas fluorescentes del analito estándar versus la concentración de analito: F= 435285x + 847,13 C. Donde F es la intensidad fluorescente relativa y C la concentración de NFZ. El coeficiente de correlación fue 0.9998. Precisión y exactitud La precisión del método basada en la repetibilidad fue optimizada, por inyecciones replicadas (n = 6) de seis soluciones estándar preparadas por el método de adición patrón cubriendo diferentes niveles de concentración. La exactitud fue determinada y expresada por el error relativo porcentual el cual estuvo siempre por debajo de 5 %. Análisis de fármacos El método desarrollado fue aplicado a la determinación de NFZ en muestras farmacéuticas comerciales. Las muestras fueron: Mirus-S Oftálmico (Alcon, Bs. As., Argentina) con un contenido nominal de 0,12 mg ml de NFZ. Dazolin Nasal (Roux-Ocefa, Bs. As., Argentina) con un contenido nominal de 1 mg ml de NFZ. Mirus Oftálmico (Alcon, Bs. As., Argentina) con un contenido nominal de 0,25 mg ml de NFZ, y también conteniendo 3 mg ml de maleato de feniramina. Panoptic Oftálmico (Bausch & Lomb, Bs. As., Argentina) con un contenido nominal de 0,5 mg ml de NFZ, y también conteniendo 0,01 mg ml de clorhidrato de difenhidramina. Los resultados son mostrados en la Tabla 2. Tabla 2: Análisis de nafazolina en diferentes muestras farmacéuticas comerciales Muestra*           Cantidad          Nafazolina encontrada              E% nominal (mg )               (mg ) Mirus-S            0,12                            0.123                           2,5 Dazolin            1,00                             0.964                           3,6 Mirus               0,25                             0.238                           4,8 Panoptic          0,50                             0.525                           5 4. Conclusiones El método espectrofluorimétrico propuesto para la determinación de nafazolina en muestras farmacéuticas tiene las ventajas de la simplicidad, velocidad, precisión y el uso de equipamiento y reactivos de bajo costo. El método fue satisfactoriamente aplicado al análisis de formulaciones comerciales. Los resultados estuvieron en buena concordancia con el contenido rotulado con un error menor al 5%. La velocidad de muestreo fue de 30 muestras.h-1 El método tiene la ventaja de que no se observan interferencias de la señal de nafazolina producidas por la presencia de maleato de fenilamina o clorhidrato de difenhidramina en las formulas de Mirus y Panoptic ni debido a los excipientes comunes en las fórmulas analizadas. 5. Referencias 1 - A. Goodman-Hillman, T. Rall, A. Nier and P. Taylor, The Pharmacologycal Basic of Therapeutic, McGraw-Hill, New York (1996). 2 - H. Goicoechea and A. Olivieri, Anal. Chim. Acta 453 (2002), pp. 289–300. 3 - K.M. Kelani, J. AOAC Int. 81 (1998), pp. 1128–1134. 4 - S. Goenechea, J. Chromatogr. 36 (1968), pp. 375–377. 5 - M. Massaccesi, Pharm. Acta Helv. 62 (1987), pp. 302–305. 6 - R. Bocic, C. Vallejos, A. Álvarez-Luege and F. López, J. AOAC Int. 75 (1992), pp. 902–904. 7 - S.C. Ruckmick, D.F. Marsh and D.T. Duong, J. Pharm. Sci. 84 (1995), pp. 502–507. 8 - A.F. Marchesini, M.R. Williner, V.E. Mantovani, J.C. Robles and H.C. Goicoechea, J. Pharm. Biomed. Anal. 31 (2003), pp. 39–46. 9 - J.M. Lemus Gallego and J. Perez Arroyo, J. Chromatogr. B 784 (2003), pp. 39–47. 10 - J.M. Lemus Gallego and J. Perez Arroyo, J. Sep. Sci. 26 (2003), pp. 947–952. 11 - S. Khalil, Mikrochim. Acta 130 (1999), pp. 181–184 12 - J.L. Manzoori and M. Amjadi, Indian J. Chem. A 42 (2003), pp. 2988–2992. 13 - S.L. McCall and J.D. Winefordner, Anal. Chem. 55 (1983), pp. 391–393. 14 - A. Segura Carretero, C. Cruces Blanco, B. Cañabate Díaz and A. Fernández Gutiérrez, Analyst 123 (1998), pp. 1069–1071. 15 - A. Fernández Gutiérrez, A. Segura Carretero, B. Cañabate Díaz and C. Cruces Blanco, Appl. Spectrosc. 53 (1999), pp. 741–744.