Desarrollo de un Inmunosensor utilizando electrodos impresos modificados con nanotubos de carbono aplicado a la determinación de Botritos cinerea en vid vinífera.

FENÁNDEZ BALDO M.; PEREIRA S.; FRENÁNDEZ G.; MESSINA G.; RABA J.; SANZ M.

Códoba -Argentina

Congreso; III Congreso de Ciencia y Tecnología de los Alimentos; 2009

Ministerio de Ciencia y Tecnología, conjuntamente con el Ministerio de Agricultura, Ganadería y Alimentos y el Ministerio de Industria, Comercio y Trabajo de la Provincia de Córdoba.

Desarrollo de un Inmunosensor utilizando electrodos impresos modificados con nanotubos de carbono aplicado a la determinación de Botrytis cinerea en vid vinífera. Fernández Baldo M*, Pereira S, Fernández G, Messina G, Raba J, Sanz  M INQUISAL-CONICET, Departamento de Química, Facultad de Química, Bioquímica y Farmacia, Universidad Nacional de San Luis, Chacabuco y Pedernera 5700, San Luis, Argentina. *mbaldo@unsl.edu.ar Botrytis cinerea es el agente causal de la podredumbre gris en productos frutihortícolas, ocasionando importantes pérdidas postcosecha. Además,  la resistencia a los fungicidas y la demanda pública de reducir su uso, crean la necesidad de desarrollar métodos alternativos de control. Nuestro objetivo fue desarrollar una metodología rápida de análisis capaz de detectar y cuantificar B. cinerea a partir de muestras de uvas viníferas. Se desarrolló un inmunosensor competitivo utilizando electrodos de láminas impresas de  grafito (GSPE) modificados con nanotubos de carbono multi-pared (MWCNT) para la detección y cuantificación de B. cinerea en uvas viníferas. La extracción de antígenos purificados de B. cinerea se realizó con nitrógeno líquido a partir de cultivos de 7 días de incubación en Agar Papa-Dextrosa, recogiendo la suspensión en buffer PBS. Los antígenos presentes en la muestra compiten inmunológicamente por un anticuerpo anti B. cinerea IgG de ratón, con los antígenos purificados inmovilizados en el disco rotatorio del sensor, el que es detectado mediante un segundo anticuerpo anti-IgG de ratón marcado con la enzima peroxidasa. La cual, en presencia de peróxido de hidrógeno, cataliza la oxidación de 4-ter-butilcatecol a 4-ter-butil-ortoquinona, que es reducida electroquímicamente en la superficie del GSPE-MWCNT a -150 mV. La corriente medida es inversamente proporcional a la concentración de antígeno presente en la muestra. Se realizó una curva de calibrado en el rango de 0-100 µg mL-1 de antígenos específicos de B. cinerea para la cuantificación del mismo en muestras de uvas.  La ecuación fue: i = 526.03 - 4.78 * CB. cinerea, con un coeficiente de regresión lineal r = 0,996. El coeficiente de variación para la determinación de 25 µg mL-1 B. cinerea fue 4% (n = 6). El límite de detección para el método propuesto fue 0,02 µg ml-1. Se inocularon uvas viníferas con una suspensión de 1.106 conidias mL-1 de B. cinerea. Las muestras fueron analizadas a los 0, 1, 2, 5 y 10 días. Una muestra no inoculada constituyó nuestro blanco. Cada fruto fue sometido a un mortereado y luego fue recogido en buffer PBS. Cada muestra fue sembrada en cultivos Agar Papa-Dextrosa. Al cabo de 9 días de incubación se aisló e identificó la presencia de B. cinerea a través de técnicas macroscópicas y microscópicas, corroboradas contra cepas de referencia. Esto comprueba la eficacia del método desarrollado. El inmunosensor desarrollado permitió la detección y cuantificación de B. cinerea. Fue capaz de operar como una unidad rápida, sensible y selectiva, acoplado a un sistema FIA, presentando un tiempo total de análisis menor a 30 minutos. Nuestro biosensor sería de fácil aplicación en la Industria Vitivinícola para la determinación de B. cinerea como método de rutina.