Nuevo Método para la Determinación de Perfiles Elementales por ICP-MS en Fracciones Proteicas de Líquido Sinovial.

MOYANO M. F.; MARIÑO REPIZO, L.; ACOSTA, M; GIL R. A.; MARTINEZ L. D.

La Plata

Congreso; 8º Congreso Argentino de Quimica Analitica; 2015

Asosciacion Argentina de Quimuca Analitica

Los oligoelementos actúan como cofactores enzimaticos en el organismo y se encuentran a nivel de trazas, la deficiencia de estos se vincula con ciertas patologias[1]. Algunos estudios han estimado el rol de los oligoelementos en la etiología y patogénesis de la artritis reumatoide (AR), analizando concentraciones de elementos en el líquido sinovial (LS) de pacientes con AR [1]. Por esto, la identificación y detección de metaloenzimas (ej: ceruloplasmina) presenta un marcado interés en la actualidad2. La determinación elemental de trazas en fluidos corporales es un protocolo ampliamente utilizado. Actualmente la medición mediante plasma acoplado inductivamente con detección de masas (ICP-MS) se destaca por sus numerosas ventajas [1,3].El objetivo del presente trabajo fue desarrollar un método preciso, sensible y robusto para la determinación de perfiles elementales por ICP-MS en fracciones proteicas de líquido sinovial humano separadas por electroforesis. Se realizó la separación proteíca con electroforesis en gel de poliacrilamida no desnaturalizante Native-Page (N-Page). Las fracciones obtenidas fueron disueltas, diluidas y posteriormente analizadas por ICP-MS. El procedimiento de análisis elemental fue efectivo, basado en evitar la inestabilidad del plasma y minimizar los inconvenientes del instrumental de ICP-MS. N-Page permitió la separación de proteínas sin la disociación de los elementos unidos a fracciones[2]. La exactitud del método propuesto fue verificada analizando muestras enriquecidas, así como también, comparando los resultados con muestras tratadas en forma convencional mediante digestión ácida con microondas. Con el uso combinado de ambas técnicas(N-Page/ICP-MS), se logro definir perfiles elementales y su distribución bioquímica en LS. El método desarrollado cuenta con la elevada sensibilidad propia del análisis por ICP-MS y las ventajas de la separación electroforética de N-PAGE: mínimo volumen de muestra, bajo costo, mínimo mantenimiento, alto rendimiento, y eficiente separación. La información obtenida es potencialmente importante para dilucidar el rol que los oligoelementos tienen en la fisiopatología de la enfermedad.