EVALUACIÓN DE LAS CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO DE MUESTRAS BIOLÓGICAS Y EL POSTERIOR EFECTO DE MATRIZ SOBRE LAS CONCENTRACIONES DE CARNITINA Y ACETILCARNITINA MEDIANTE UPLC-ESI-MS/MS.

A.C. ISAGUIRRE; A.V. LAPIERRE; S. CERUTTI

Los Cocos, Córdoba Argentina

Congreso; II Congreso Argentino de Espectrometría de Masas; 2014

Carnitina es un metabolito endógeno presente en la mayoría de los mamíferos. Entre algunas de las funciones biológicas de este compuesto se encuentra la disminución de formación de radicales libres en distintos tejidos, el mantenimiento de la concentración celular de coenzima A libre (CoA) y el transporte de ácidos grasos de cadena larga hacia el interior de la mitocondria para su posterior β-oxidación y producción de energía celular. El metabolismo de carnitina se encuentra íntimamente ligado a una gran variedad de trastornos metabólicos, lo cual da lugar a una redistribución de la misma y de sus acilcarnitinas derivadas. En consecuencia, el monitoreo de los niveles de estos compuestos en fluidos biológicos constituye una herramienta poderosa para estudios clínicos de diagnóstico [1]. Los estudios de estabilidad de las muestras biológicas son de vital importancia ya que, en numerosas ocasiones, las mismas sufren cambios abruptos de temperatura o son almacenadas por tiempos prolongados y en condiciones diversas. Esto ocasiona que los analitos presentes en las mismas puedan sufrir procesos de degradación y/o formación de especies interferentes que conducirán a que el análisis cuantitativo realizado proporcione datos erróneos. La mayoría de los materiales biológicos son susceptibles de sufrir, por efecto de la temperatura, cambios conformacionales o disociativos, que conducirán, a través del paso del tiempo, a una alteración en los resultados del procedimiento analítico. En consecuencia, los factores que de forma más clara afectan a la estabilidad y a la formación de nuevas especies son la temperatura a la que se mantiene la muestra y el tiempo que transcurre desde su obtención hasta el momento de análisis [2]. En este contexto, en el presente trabajo, se desarrolló una metodología sensible, robusta y precisa para la determinación de carnitina y acetilcarnitina en muestras de orina humana mediante cromatografía líquida de ultra elevada resolución asociada a espectrometría de masa en tándem [1,3]. Los estudios desarrollados se basaron en la evaluación de los niveles de los analitos mencionados con el objeto de monitorear el efecto de matriz y, en consecuencia la estabilidad, de las muestras de orina humana en función del tiempo (> 5 meses de almacenamiento y tomadas en el mismo día del análisis) y de la temperatura de almacenamiento (-20ºC, 4ºC, 24ºC y 37ºC). Los resultados obtenidos mostraron un elevado efecto de matriz, >50% para las muestras con más de 5 meses de almacenamiento, mientras que para aquellas analizadas en el mismo día de su toma, el efecto de matriz observado fue mínimo. Por otra parte, los ensayos realizados a diferentes temperaturas revelaron un aumento del efecto de matriz con el incremento de la temperatura de almacenamiento. En consecuencia, el presente estudio demuestra claramente la importancia de contar con una metodología analítica adecuada para monitorear variaciones indicativas de cambios de la matriz de la muestra, y de su estabilidad; en particular, en las condiciones de almacenamiento de rutina empleadas para muestras que se utilizan para el diagnóstico clínico.