DESARROLLO DE UNA METODOLOGÍA NOVEDOSA DE ANÁLISIS DEL FÁRMACO ANTICHAGÁSICO BENZNIDAZOL EN SANGRE. DETERMINACIÓN MEDIANTE UPLC-MS/MS

N. MARTINEZ; E. MARSON; E. GULIN; J. RABA; S. CERUTTI

Los Cocos, Córdoba

Congreso; II Congreso Argentino de Espectrometría de Masas; 2014

Sociedad Argentina de Espectrometría de Masas

La enfermedad de Chagas, causada por el parásito protozoo Trypanosoma cruzi, es de enorme interés sanitario. Su distribución geográfica es muy amplia, con características endémicas en América del Sur. Los fármacos utilizados actualmente para su tratamiento son benznidazol (BNZ) y nifurtimox. Las propiedades farmacológicas de los mismos, aún no han sido estudiadas en detalle y la información disponible sobre su farmacocinética, bajo distintas variantes de farmacoterapia es prácticamente inexistente. Su administración requiere de periodos prolongados con riesgos significativos de toxicidad, especialmente en adultos. Por lo mencionado anteriormente, resulta de gran importancia el desarrollo de metodologías analíticas para el monitoreo de drogas antichagásicas, en particular BNZ, con potencial actividad tóxica en muestras biológicas. La gota de sangre seca sobre el papel de filtro como método de muestreo para el bioanálisis cuantitativo de pequeñas moléculas, permite la reducción en los volúmenes de muestra necesarios, simplificando de este modo la recolección, el procesamiento y envío, así como los gastos de almacenamiento. El presente trabajo propone una metodología novedosa de extracción de BZN con MeOH 0,1 % de ácido fórmico en muestras de sangre seca extraída de ratones utilizados como modelo de farmacoterapia de BNZ, depositadas sobre papel de filtro (Whatman 903), previo a su inyección al sistema de cromatografía líquida de alta resolución (UPLC) y detección/cuantificación por espectrometría de masa en tándem (MS/MS). La separación cromatográfica se realizó en una columna C18 de rápida resolución, empleando elución en gradiente, con un tiempo de retención de BNZ de 2.89 min. Se evaluó el efecto de la matriz biológica sobre la ionización de BNZ y no se observó ni supresión, ni exaltación de la señal del analito bajo estudio. La metodología fue validada a través de estudios de recuperación. El límite de cuantificación obtenido permitió la determinación de concentraciones nanomolares de BNZ. La metodología propuesta aporta una herramienta sensible, selectiva, sencilla y confiable para la detección cuantitativa de BZN en muestras de sangre y, a su vez, genera información valiosa para el abordaje de modelos experimentales en dosis de farmacoterapia para el estudio in vivo del tratamiento de la enfermedad de Chagas.