Desarrollo de una metodología novedosa para la determinación de malondialdehído en hojas de plantas de melon mediante UPLC-MS/MS

YONNY, M. E.; RODRIGUEZ TORRESI, A.; NAZARENO M. A.; CERUTTI, S.

Los Cocos, Córdoba

Congreso; II Congreso Argentino de Espectrometría de Masas; 2014

Sociedad Argentina de Espectrometría de Masa

En la producción temprana del melón (Cucumis melo) se utilizan estructuras de micro y macro túneles plásticos. En ellas, las temperaturas extremas generarían un estrés abiótico en las plantas que trae aparejado un estrés oxidativo, capaz de producir alteraciones en su funcionamiento interno1. El estrés oxidativo es el desequilibrio entre los mecanismos prooxidantes y antioxidantes en un sistema biológico. Entre las especies oxidantes se encuentran las especies reactivas de oxígeno y enzimas prooxidantes; las cuales atacan a los lípidos insaturados componentes de las membranas celulares conduciendo a la peroxidación lipídica2, siendo los hidroperóxidos lipídicos, sus productos de oxidación primaria. Dado que estos compuestos son inestables, el proceso oxidativo continúa formando productos secundarios oxigenados, entre ellos, el malondialdehído (MDA). El mismo ha sido detectado en diversos sistemas biológicos como un biomarcador del grado de avance del proceso oxidativo. En la mayoría de las metodologías, la determinación de MDA implica su derivatización con ácido tiobarbitúrico o con hidrazinas. Sin embargo, el objetivo del presente trabajo se basó en la optimización de una metodología novedosa para la determinación de MDA en hojas de melón utilizando cromatografía líquida de ultra elevada performance, con fase estacionaria reversa, acoplada a espectrometría de masas en tándem (UPLC-MS/MS), equipado con una fuente de ionización de electrospray configurada en modo positivo, sin la necesidad de empleo de agentes derivatizantes. La detección se realizó por monitoreo selectivo del ión pseudomolecular [M+H]+ de MDA; siendo el tiempo de retención del analito de 1,7 min en una corrida de 3,0 min de duración, considerando el acondicionamiento de la columna. Bajo condiciones experimentales óptimas, la respuesta obtenida fue lineal en el intervalo entre 10 y 1500 µg L-1 de MDA (R2=0,9998). Los límites de detección (LOD) y de cuantificación (LOQ) fueron 0,1 µg L-1 y 0,5 µg L-1; respectivamente. En la aplicación de la metodología propuesta para cuantificar MDA en hojas de melón se observó un 90% de supresión de señal por efecto de matriz. Para minimizar dicho efecto, se utilizó extracción en fase sólida (SPE), basada en el empleo de cartuchos poliméricos, como método de limpieza de la muestra. La mejora de la señal obtenida en función de la limpieza de la muestra fue de aproximadamente 15 veces. La precisión fue estudiada mediante el análisis por triplicado de réplicas, siendo la desviación estándar relativa (RSD) menor al 7,0%. Luego de una revisión exhaustiva de la bibliografía científica se encontró sólo un estudio en el que también se determinó MDA sin derivatizar3. Sin embargo, nuestro trabajo constituye el primer reporte de una metodología analítica que emplea columnas de UPLC y ionización por electrospray en modo positivo, lo que conlleva a la obtención de límites de detección en el orden de las partes por trillón y la posibilidad de aplicación de la metodología al monitoreo de MDA en muestras vegetales de hojas de melón como un indicador de su estado oxidativo. Además, el corto tiempo de análisis alcanzado, prevé la posibilidad de realizar análisis de rutina de MDA en muestras diversas.