INMUNOSENSOR MICRFLUIDICO UTILIZANDO COMO PLATAFORMA NANOPARTICULAS DE ORO ELECTRODEPOSITADAS PARA EL DIAGNOSTICO AUTOMATIZADO DE LA ENFERMEDAD DE CHAGAS

SIRLEY V. PEREIRA; ; ; PEDRO ARANDA VAZQUEZ; LIGIA AMAYA-MUNDET; ; GERMAN A. MESSINA;; FRANCO A. BERTOLINO;; JULIO RABA

Mendoza

Congreso; VII CONGRESO ARGENTINO DE QUÍMICA ANALÍTICA; 2013

El objetivo de este trabajo fue desarrollar un inmunosensor microfluídico para la cuantificación de anticuerpos IgG anti-T. cruzi aplicado al diagnóstico de la enfermedad de Chagas. Esta parasitosis representa uno de los problemas de salud más relevantes que enfrentan los países latinoamericanos [1]. Con el fin de llevar a cabo la detección de dichos anticuerpos, el electrodo de láminas impresas de carbono (SPCE) acoplado al sistema microfluídico fue modificado por electrodeposición de nanopartículas de oro (AuNPs) [2-4] como estrategia para incrementar la sensibilidad del dispositivo. Una vez realizado este procedimiento, se empleó acido 3-mercaptopropiónico (MPA) con el objeto de generar una plataforma para la funcionalización con proteínas antigénicas de T. cruzi. El SPCE modificado permitió la detección sensible de anticuerpos específicos anti-T. cruzi de tipo IgG mediante el empleo de un enzimo-inmunoensayo no competitivo en el que los anticuerpos presentes en las muestras de suero reaccionaron inmunológicamente con dichos antígenos y posteriormente fueron cuantificados utilizando un segundo anticuerpo marcado con la enzima peroxidasa de rábano picante (HRP) y 4-terbutilcatecol (4-TBQ) como mediador electroquímico. HRP en presencia de peróxido de hidrógeno cataliza la oxidación de 4-TBQ, cuya reducción electroquímica fue detectada sobre la superficie del electrodo de oro a -0,1 V. La corriente obtenida como respuesta a la reducción del producto de la reacción enzimática fue directamente proporcional a la actividad enzimática y consecuentemente a la concentración de anticuerpos de tipo IgG anti-T. cruzi presente en muestras de suero. La detección electroquímica se realizó en 1 minuto y el tiempo total del ensayo fue de 26 minutos. Los límites de detección calculados para la detección electroquímica fueron de 3.065 ng mL-1, con coeficientes de variación intra- e inter-ensayo menores a 6,95%. La performance analítica mostrada por T. cruzi antígeno?MPA?AuNP/SPCE indica claramente la utilidad de este tipo de diseño para el desarrollo de inmunosensores electroquímicos aplicados al ámbito del diagnóstico clínico [5].