Fluorescencia Inducida por Laser aplicado en un sensor Bioanalítico para la cuantificación de anticuerpos IgG anti-Helicobacter pylori en muestras de suero humano

SEIA MARCO A.; PEREIRA SIRLEY V.; FONTAN CARLOS A.; DE VITO IRMA E.; MESSINA GERMÁN A.; RABA JULIO.

Santa Fé

Congreso; VI Congreso Argentino de Química Analítica-Universidad Nacional del Litoral; 2011

Asociación Argentina de Químicos Analíticos

Helicobacter pylori es un microorganismo que afecta al 50% de la población mundial. Su patogenia le permite causar desde los Reflujos Gastroesofágicos hasta el Cáncer Gástrico y el Linfoma de MALT (Linfoma de la Mucosa Asociado al Tejido Linfoide) [1], por ello ha sido clasificado por la Agencia Internacional de Investigación del Cáncer dentro del grupo I de carcinógenos. En este trabajo se describe el desarrollo de un inmunosensor microfluídico acoplado a fibras ópticas con detección LIF (Fluorescencias Inducida por Láser) para la cuantificación de anticuerpos IgG anti-helicobacter pylori en muestras de suero humano. El sensor es un dispositivo microfluídico construido de plexiglás, el cual se integró a un sistema FIA (Análisis por Inyección en Flujo), para llevar a cabo la detección del analito empleando un inmunoensayo no competitivo [2]. Antígenos purificados de H. pylori fueron inmovilizados sobre partículas de vidrio de porosidad controlado, modificado con grupos 3-aminopropilo. Dichas partículas fueron empaquetadas en el microcanal central del dispositivo. Posteriormente, los anticuerpos presentes en las muestras, reaccionaron inmunológicamente con los antígenos inmovilizados. A continuación, los anticuerpos que reaccionaron fueron cuantificados utilizando un segundo anticuerpo anti-cadenas γ humanos, marcado con isotiocianato de fluoresceína. La fluorescencia relativa obtenida del inmunocomplejo generado fue directamente proporcional a la concentración de anticuerpos de tipo IgG en las muestras de suero. El tiempo total del ensayo fue de 25 minutos, habiendo realizado la detección por LIF en menos de 1 minuto. Los límites de detección calculados para la metodología propuesta y el procedimiento de ELISA fueron de 0,21 y 2,1 UmL-1 respectivamente y los coeficientes de variación intra e inter ensayo fueron menores al 5%. Los resultados obtenidos muestran la utilidad potencial de nuestro microbiochip para la determinación rápida de anticuerpos de tipo IgG anti H. pylori.