Desarrollo de un método rápido para la cuantificación de Botrytis cinerea en frutas almacenadas

FERNÁNDEZ BALDO, MARTÍN A; FERNÁNDEZ, JORGE G; PEREIRA, SIRLEY V; MESSINA, GERMÁN A; RABA, JULIO; SANZ, MARÍA I

Congreso; 6to Congreso Argentino de Química Analítica.; 2011

Botrytis cinerea es un hongo fitopatógeno responsable de la podredumbre gris, enfermedad que afecta cultivos de importancia económica [1]. Frecuentemente se presenta como infección latente (fruta aparentemente sana) pudiendo deteriorarse repentinamente, debido a la evolución de la misma, apareciendo los síntomas visibles de la enfermedad [1]. También es difícil de controlar mediante la utilización de fungicidas debido a su variabilidad genética y el desarrollo de cepas resistentes a muchos productos utilizados [2]. Actualmente, existen presiones de los consumidores a reducir estos productos en la cadena alimentaria y el medio ambiente [3, 4]. Por estas razones, es importante contar con métodos de detección y cuantificación del fitopatógeno que sean simples y rápidos a los efectos del tratamiento adecuado de las frutas. En el presente trabajo se desarrolló y validó un método rápido para la cuantificación de B. cinerea en manzanas (Red Delicious), uvas de mesa (Moscatel rosada), y peras (William’s). La determinación de B. cinerea se realizó mediante un inmunoensayo competitivo indirecto, donde antígenos purificados del hongo fueron inmovilizados sobre microplacas mediante un agente entrecruzante. Los antígenos presentes en la muestra, compiten inmunológicamente por un anticuerpo monoclonal, anti B. cinerea IgG de ratón, con los antígenos purificados inmovilizados, el cual es detectado mediante un segundo anticuerpo anti-IgG de ratón marcado con la enzima peroxidasa utilizando una solución sustrato de ortofenilendiamina. La respuesta obtenida del producto de la reacción enzimática fue medida por espectrofotometría a 490 nm y es inversamente proporcional a la cantidad de antígenos de B. cinerea presentes en la muestra de fruta. Para el desarrollo del método propuesto se realizaron estudios de reactividad cruzada entre el anticuerpo monoclonal empleado y otros hongos fitopatógenos frecuentemente aislados en estas muestras de frutas en Argentina. Además, el método desarrollado fue validado frente a un método de cuantificación de ADN específico de B. cinerea [5]. Estos estudios mostraron una buena correlación. El método propuesto mostró elevada sensibilidad y menores límites de detección que otros métodos desarrollados hasta el momento [4, 6] siendo capaz de detectar la presencia del hongo aún en frutas que no mostraban síntomas visibles de la enfermedad, presentando además, las ventajas de bajo costo, fácil operación y corto tiempo de análisis, evidenciando su posible aplicación en la industria agroalimentaria en el control de calidad fitosanitario.