Derivatización/Separación Cromatográfica de Enantiómeros de Carnitina y Detección MS/MS para el Control de Calidad de Medicamentos de Amplio Uso

A.C. ISAGUIRRE, M.R. CANALES, A.V. LAPIERRE, J. RABA, L.D. MARTINEZ, S. CERUTTI.

Santa Fe

Congreso; 6° Congreso Argentino de Química Analítica; 2011

Asociación Argentina de Química Analítica

Carnitina (Carn, C7H15NO3, 161 g mol-1) es un metabolito endógeno presente en mamíferos [1, 2].  Siendo este compuesto quiral, sólo L-Carn ocurre naturalmente y presenta propiedades farmacológicas y nutricionales importantes. Investigaciones recientes han demostrado que D-Carn actúa como un inhibidor competitivo de los sistemas de captación activos de L-Carn, lo cual conduce a una carencia funcional de L-Carn en los músculos esqueléticos y cardíaco, dando origen a miastenia y arritmias cardíacas [3]. L-Carn puede sintetizarse endógenamente o provenir de fuentes exógenas cómo los suplementos dietarios. Actualmente, el contenido de D-Carnitina en formulaciones farmacéuticas y nutricionales está limitado a un 4.0% por diversas Farmacopeas Internacionales [4, 5]. En este sentido y luego de una búsqueda exhaustiva en la literatura científica, se encontró que no existen métodos que combinen la cromatografía líquida y la espectrometría de masas para la separación y cuantificación de los enantiómeros de carnitina.  En consecuencia, el presente trabajo se basó en el desarrollo de una metodología sensible y selectiva para la resolución cromatográfica y determinación cuantitativa de L- y D-carnitina mediante un procedimiento de derivatización y separación asociada a ionización por electrospray acoplada a un detector masa triple cuadrupolo operando en modo de monitoreo de reacción múltiple (MRM). El procedimiento de derivatización se basó en la esterificación del grupo hidroxilo quiral de carnitina mediante el uso del reactivo9-fluorenilmetil cloroformato, generándose los derivados disterómicos no polares del analito bajo estudio ((D,L)-Carn-FMOC). Luego, se procedió a la inyección de las muestras en una columna cromatográfica de fase reversa (C18, 2.1 × 50 mm, 1.7 µm) que resolvió a diferentes tiempos los enantiómeros derivatizados. Posteriormente éstos fueron identificados y cuantificados empleando los siguientes fragmentos iónicos del precursor de m/z 384 del compuesto resultante de la derivatización, (D,L)-Carn-FMOC: 179 u. (ion de cuantificación), 206 u., 162 u., 144 u., 103 u., 85 u. y 60 u. (iones de confirmación). Precisión (expresada como desviación estándar relativa (RSD (%)) fue menor del 0.1% para los tiempos de retención de los dos analitos (D,L-Carnitina) y < 5.0% para sus áreas de picos, para la recuperación se obtuvieron valores entre 90-102%. Los límites de detección para L y D-carnitina fueron de 1.0 y 3.0 µg L-1, respectivamente. El método propuesto se aplicó a suplementos dietarios y medicamentos rotulados como L-carnitina (comprimidos, bebibles e inyectables). Se detectaron concentraciones de ambos enantiómeros en las muestras analizadas.