BÚSQUEDA DE NUEVAS ESTRATEGIAS EN DOLOR NEUROPÁTICO: REGULACIÓN FARMACOLÓGICA DE LA ACTIVACIÓN DE MASTOCITOS INDUCIDA POR ESTÍMULOS PRO-INFLAMATORIOS

COLL R; PENISSI AB; MARIANI ML

Congreso; I Congreso Interuniversitario I+D+i Mendoza; 2021

IntroducciónEl dolor neuropático se define como aquel ?dolor iniciado o causado por una lesión primaria o disfunción en el sistema nervioso?. Involucra eventos celulares y moleculares que comprenden mecanismos inmunológicos con activación de células del sistema inmune. El sustrato neuroquímico fundamental del dolor neuropático es la inflamación neurogénica, que es el fenómeno biológico que sigue a la estimulación de nociceptores y fibras sensoriales. Se inicia por la acción de neuropéptidos liberados a partir de las terminales nerviosas. Tras la estimulación nerviosa, se produce activación antidrómica de las fibras aferentes primarias seguida de liberación de neuropéptidos inflamatorios y vasoactivos que da origen a una respuesta inflamatoria local, de origen neural, con las características típicas de una respuesta inflamatoria. Entre los principales tipos celulares involucrados en la génesis y mantenimiento de la inflamación neurogénica destacan los mastocitos. Son células especializadas del tejido conectivo que liberan, en respuesta a la activación por estímulos externos, una gran variedad de mediadores biológicos. La activación de mastocitos, causada por neuropéptidos pro-inflamatorios liberados por terminales nerviosas, resulta en degranulación con liberación de serotonina, histamina, triptasas y citoquinas que amplifican la respuesta inflamatoria inicial, provocando efectos a nivel vascular con vasodilatación y extravasación plasmática y efectos a nivel neural con estimulación y sensibilización de las terminales nerviosas. Se establece un mecanismo de retroalimentación positiva que cierra un círculo vicioso mastocito/nociceptor que conduce a inflamación neurogénica y dolor neuropático.Las lactonas sesquiterpénicas 𝛼,𝛽-insaturadas deshidroleucodina y xantatina, y el compuesto de síntesis 3-benciloximetil-5H-furan-2-ona inhiben la degranulación inducida por compuesto 48/80 y por ionóforo de calcio A23187 en mastocitos humanos LAD2 y en mastocitos peritoneales de rata. Sin embargo, se desconoce el efecto de estas moléculas sobre la activación de mastocitos inducida por neuropéptidos pro-inflamatorios. Deshidroleucodina es el principio activo de la especie vegetal Artemisia douglasiana Besser de la zona de Cuyo, conocida como ?matico?; y xantatina se obtiene de la planta regional Xanthium cavanillesii Schow, conocida como ?abrojo grande?, típica del territorio pampeano, centro y norte del país. Ambas especies son empleadas tradicionalmente en la medicina folclórica argentina.Hipótesis y ObjetivoEn esta investigación se parte de la hipótesis de que deshidroleucodina, xantatina y 3-benciloximetil-5H-furan-2-ona inhiben la activación de mastocitos inducida por neuropéptidos pro-inflamatorios. El objetivo general de este estudio es demostrar si deshidroleucodina, xantatina y 3-benciloximetil-5H-furan-2-ona inhiben la activación de mastocitos inducida por neuropéptidos pro-inflamatorios.Materiales y MétodosEste trabajo se basó en una simulación in vitro de un escenario de inflamación neurogénica involucrando neuropéptidos pro-inflamatorios y mastocitos, para posteriormente analizar potenciales estrategias terapéuticas en el manejo del dolor neuropático.En el primer grupo de experimentos se determinó la concentración de neuropéptido que indujo máxima degranulación de mastocitos sin provocar muerte celular. En el segundo grupo de experimentos se evaluaron los efectos de diferentes dosis de deshidroleucodina, xantatina y 3-benciloximetil-5H-furan-2-ona sobre la activación mastocitaria inducida por neuropéptidos. Se realizaron estudios dosis respuesta usando concentraciones de lactonas de 4, 12, 20, 40, 80 y 160 μM. También se evaluó la potencia de las lactonas comparada con estabilizadores mastocitarios de referencia, ketotifeno y cromoglicato de sodio. Se probaron además diferentes combinaciones de las lactonas. En todos los casos se evaluó vitalidad celular.En el tercer grupo de experimentos se evaluó, por cromatografía en capa fina, la estabilidad y reactividad química de las lactonas antes y después de las incubaciones.Se midieron los niveles de serotonina mastocitaria por HPLC y se calculó el porcentaje de liberación de serotonina como marcador de activación de estas células. Los resultados bioquímicos se respaldaron con estudios morfológicos por microscopía óptica.Los resultados se expresaron como porcentaje de serotonina liberada y se presentan como media ± SEM. La diferencia entre grupos se determinó con análisis de la varianza (ANOVA-1) seguida por test de Tukey-Kramer. P xantatina > 3-benciloximetil-5H-furan-2-ona (antes de estimulación con sustancia P) y xantatina > deshidroleucodina > ketotifeno > cromoglicato de sodio > 3-benciloximetil-5H-furan-2-ona (antes de estimulación con neurotensina).Ninguna de las combinaciones de lactonas estudiadas supera los efectos inhibitorios demostrados individualmente.Los estudios morfológicos revelan activación celular tras estimulación con neuropéptidos, al igual que con 3-benciloximetil-5H-furan-2-ona. Deshidroleucodina y xantatina muestran grados menores de degranulación. Discusión y ConclusionesDeshidroleucodina y xantatina inhiben la liberación de serotonina de mastocitos peritoneales de rata inducida por sustancia P y neurotensina. Proponemos a estas lactonas de interés farmacológico para la investigación de terapias dirigidas a patologías mediadas por mastocitos, como la inflamación neurogénica y el dolor neuropático.Esta investigación permite, además, la oportunidad de hacer una puesta en valor de la medicina tradicional argentina a través del estudio de principios activos derivados de plantas regionales y hacer una contribución científica para la validación y la legitimación de su uso.