Aislamiento y purificación de la proteína flagelar de 27kDa rica en grupos tioles detectada durante la maduración de la gameta masculina.

MONCLÚS MA,; SAEZ LANCELOTTI TE; BOARELLI PV; CABRILLANA ME; VINCENTI AE; ZANETTI S; YUNES R; FORNÉS MW

Mendoza

Jornada; XXI Jornadas de investigación y III Jornadas de Posgrado de la Universidad Nacional de Cuyo; 2008

Universidad Nacional de Cuyo

El  proceso de óxido-reducción (paso de grupos tioles S-H a puentes disulfuro S-S) que se evidencia en proteínas espermáticas durante el tránsito epididimario es fundamental para la fisiología de la gameta. Utilizando marcadores específicos (monobromobimano-mbb) para grupos tioles se identificaron las principales proteínas involucradas. Se separaron los espermatozoides en cabeza y cola por sonicación y luego se fraccionaron sendas partes mediante gradientes de sacarosa. Las proteínas presentes en las fracciones se estudiaron por SDS-PAGE destacándose una banda de 27 Kda (positiva para mbb) en las proteínas provenientes del flagelo. Con esta banda, siguiendo la metodología clásica, se inocularon conejos y  se obtuvieron anticuerpos policlonales detectados por immunoblot. En adelante detectaremos por immunocitoquímica su expresión durante la espermatogénesis. Por imunoprecipitación en suero de conejo, intentaremos aislar y purificar las inmunoglobulinas correspondientes. Esperamos detectar su expresión a nivel testicular y mediante anticuerpos específicos purificar dicha proteína para su posterior secuenciación.