EL TRANSPORTE INTRACELULAR DE CATEPSINA D EN CÉLULAS EPIDIDIMARIAS DE RATA

ÁLVAREZ P; CARVELLI L; SOSA MA; AGUILERA AC

VIRTUAL-MENDOZA

Congreso; 1er CONGRESO INTERUNIVERSITARIO I+D+i MENDOZA; 2021

RED INTERUNIVERSITARIA I+D+i MENDOZA

En los mamíferos, la maduración espermática se produce gracias al ambiente luminal provisto por el conducto epididimario. Este lumen contiene proteínas que podrían participar en la remodelación de la superficie de los espermatozoides como una etapa en la maduración de las gametas. Algunas de estas proteínas son enzimas lisosomales que se sintetizan en el epitelio epididimario y son secretadas al fluido por un mecanismo aún desconocido y su posible participación en la maduración de los espermatozoides es controvertida. En la mayoría de los tipos celulares, la enzima lisosomal catepsina D se transporta desde el trans Golgi Network a los compartimentos endo-lisosomales a través de receptores a manosa 6 fosfato catión dependiente e independiente (CD- y CI-MPR), aunque rutas alternativas mediadas por el receptor Sortilina, u otros tipos de receptores, son conocidas. Sortilina puede transportar catepsina D cuando la proteasa forma complejos con la proteína lisosomal prosaposina. El uso de líneas celulares inmortalizadas derivadas de epidídimo de rata, como es la línea RCE-1, representa un modelo experimental de gran importancia para estudiar el mecanismo de transporte y secreción de proteínas lisosomales en el epitelio epididimario. Resultados previos utilizando células RCE-1 confirmaron que catepsina D forma complejos con prosaposina, lo que sugiere que Sortilina participaría en el transporte de catepsina D en células epididimarias. A su vez, hemos establecido una línea celular derivada de las células RCE-1 que presentan una expresión disminuida del gen Sortilina (RCE-1KD), donde como contrapartida, la expresión del CD-MPR se encuentra aumentada, sugiriendo la existencia de una interregulación entre ambos receptores. El objetivo de este trabajo fue correlacionar la distribución de catepsina D con la del CD-MPR en células RCE-1 normales y RCE-1KD mediante inmunofluorescencia indirecta y posterior análisis cuantitativo de colocalización. En las células RCE-1 normales se observa una alta colocalización de catepsina D con Sortilina, pero no con el CD-MPR. Esto indicaría que, en condiciones normales, las células epididimarias transportan catepsina D utilizando principalmente al receptor sortilina. Cuando las células RCE-1 presentan una expresión disminuida de Sortilina (RCE1-KD), catepsina D continúa llegando a los lisosomas (colocalización con el marcador de endosomas tardíos-lisosomas, LAMP-1) y aumenta su colocalización con el CD-MPR a lo largo de todo el citoplasma. Estos resultados indican que Sortilina y CD-MPR funcionarían de manera cooperativa en el transporte de Catepsina D en células epididimarias, validando la importancia del estudio de los mecanismos moleculares que gobiernan el transporte intracelular y la actividad secretoria de las células epididimarias con el fin de entender de qué modo estas células pueden condicionar el ambiente para la maduración espermática o, en caso contrario, esa misma actividad secretoria puede conducir a la involución del órgano cuando las condiciones son desfavorables.