Efecto de la Porfirina TMP sobre Células Hep-2: Aplicación en Terapia Fotodinámica

M.G.ALVAREZ,E.I.YSLAS,G.MORI,M.LAPENNA,E.N.DURANTINI,V.RIVAROLA

Mendoza

Congreso; Sociedad Argentina de Investigación en Bioquímica y Biología Molecular (SAIB); 1999

  La terapia fotodinámica de tumores es una nueva modalidad de tratamiento basada en la administración de un agente fotosensibilizador, el cual es retenido preferentemente por los tejidos tumorales. La posterior iluminación con luz visible, conduce a la muerte celular generada por la producción de 1O2. El objetivo del presente trabajo fue estudiar el efecto fotodinámico de la 5,10,15,20-tetra (4-metoxifenil) porfirina (TMP) sobre cultivos de células Hep-2. Se midió la incorporación de TMP a concentraciones de 1, 5 y 10 mM por espectroscopia de fluorescencia, obteniéndose un rápido incremento a tiempos cortos (menos de 5 horas), alcanzando un plateau a las 24 horas. La velocidad de incorporación aumentó con la concentración. Llegando al mismo valor de saturación. Se determinó, la viabilidad por tinción con Azul Tripán. Utilizando diferentes concentraciones, períodos de incubación y rangos de longitud de onda, en ningún caso se encontró toxicidad de TMP en oscuridad. Sin embargo, cuando las células fueron iluminadas se observó un incremento en la mortalidad de forma proporcional al tiempo de irradiación y de incorporación del agente fotosensibilizador. Así, cuando TMP fue incorporada por 45 min. y las células irradiadas por 30 min., se alcanzó una mortalidad de ~50%, llegando a ~90% cuando la incorporación fue de 24 h. El espectro de acción de TMP indicó que la mayor mortalidad se produjo en el rango de 400 a 455nm. El tipo de muerte celular observada por tinción con Hematoxilina-eosina y Kit de fragmentación de ADN (Promega) fue apoptosis. La terapia fotodinámica de tumores es una nueva modalidad de tratamiento basada en la administración de un agente fotosensibilizador, el cual es retenido preferentemente por los tejidos tumorales. La posterior iluminación con luz visible, conduce a la muerte celular generada por la producción de 1O2. El objetivo del presente trabajo fue estudiar el efecto fotodinámico de la 5,10,15,20-tetra (4-metoxifenil) porfirina (TMP) sobre cultivos de células Hep-2. Se midió la incorporación de TMP a concentraciones de 1, 5 y 10 mM por espectroscopia de fluorescencia, obteniéndose un rápido incremento a tiempos cortos (menos de 5 horas), alcanzando un plateau a las 24 horas. La velocidad de incorporación aumentó con la concentración. Llegando al mismo valor de saturación. Se determinó, la viabilidad por tinción con Azul Tripán. Utilizando diferentes concentraciones, períodos de incubación y rangos de longitud de onda, en ningún caso se encontró toxicidad de TMP en oscuridad. Sin embargo, cuando las células fueron iluminadas se observó un incremento en la mortalidad de forma proporcional al tiempo de irradiación y de incorporación del agente fotosensibilizador. Así, cuando TMP fue incorporada por 45 min. y las células irradiadas por 30 min., se alcanzó una mortalidad de ~50%, llegando a ~90% cuando la incorporación fue de 24 h. El espectro de acción de TMP indicó que la mayor mortalidad se produjo en el rango de 400 a 455nm. El tipo de muerte celular observada por tinción con Hematoxilina-eosina y Kit de fragmentación de ADN (Promega) fue apoptosis. La terapia fotodinámica de tumores es una nueva modalidad de tratamiento basada en la administración de un agente fotosensibilizador, el cual es retenido preferentemente por los tejidos tumorales. La posterior iluminación con luz visible, conduce a la muerte celular generada por la producción de 1O2. El objetivo del presente trabajo fue estudiar el efecto fotodinámico de la 5,10,15,20-tetra (4-metoxifenil) porfirina (TMP) sobre cultivos de células Hep-2. Se midió la incorporación de TMP a concentraciones de 1, 5 y 10 mM por espectroscopia de fluorescencia, obteniéndose un rápido incremento a tiempos cortos (menos de 5 horas), alcanzando un plateau a las 24 horas. La velocidad de incorporación aumentó con la concentración. Llegando al mismo valor de saturación. Se determinó, la viabilidad por tinción con Azul Tripán. Utilizando diferentes concentraciones, períodos de incubación y rangos de longitud de onda, en ningún caso se encontró toxicidad de TMP en oscuridad. Sin embargo, cuando las células fueron iluminadas se observó un incremento en la mortalidad de forma proporcional al tiempo de irradiación y de incorporación del agente fotosensibilizador. Así, cuando TMP fue incorporada por 45 min. y las células irradiadas por 30 min., se alcanzó una mortalidad de ~50%, llegando a ~90% cuando la incorporación fue de 24 h. El espectro de acción de TMP indicó que la mayor mortalidad se produjo en el rango de 400 a 455nm. El tipo de muerte celular observada por tinción con Hematoxilina-eosina y Kit de fragmentación de ADN (Promega) fue apoptosis. La terapia fotodinámica de tumores es una nueva modalidad de tratamiento basada en la administración de un agente fotosensibilizador, el cual es retenido preferentemente por los tejidos tumorales. La posterior iluminación con luz visible, conduce a la muerte celular generada por la producción de 1O2. El objetivo del presente trabajo fue estudiar el efecto fotodinámico de la 5,10,15,20-tetra (4-metoxifenil) porfirina (TMP) sobre cultivos de células Hep-2. Se midió la incorporación de TMP a concentraciones de 1, 5 y 10 mM por espectroscopia de fluorescencia, obteniéndose un rápido incremento a tiempos cortos (menos de 5 horas), alcanzando un plateau a las 24 horas. La velocidad de incorporación aumentó con la concentración. Llegando al mismo valor de saturación. Se determinó, la viabilidad por tinción con Azul Tripán. Utilizando diferentes concentraciones, períodos de incubación y rangos de longitud de onda, en ningún caso se encontró toxicidad de TMP en oscuridad. Sin embargo, cuando las células fueron iluminadas se observó un incremento en la mortalidad de forma proporcional al tiempo de irradiación y de incorporación del agente fotosensibilizador. Así, cuando TMP fue incorporada por 45 min. y las células irradiadas por 30 min., se alcanzó una mortalidad de ~50%, llegando a ~90% cuando la incorporación fue de 24 h. El espectro de acción de TMP indicó que la mayor mortalidad se produjo en el rango de 400 a 455nm. El tipo de muerte celular observada por tinción con Hematoxilina-eosina y Kit de fragmentación de ADN (Promega) fue apoptosis. La terapia fotodinámica de tumores es una nueva modalidad de tratamiento basada en la administración de un agente fotosensibilizador, el cual es retenido preferentemente por los tejidos tumorales. La posterior iluminación con luz visible, conduce a la muerte celular generada por la producción de 1O2. El objetivo del presente trabajo fue estudiar el efecto fotodinámico de la 5,10,15,20-tetra (4-metoxifenil) porfirina (TMP) sobre cultivos de células Hep-2. Se midió la incorporación de TMP a concentraciones de 1, 5 y 10 mM por espectroscopia de fluorescencia, obteniéndose un rápido incremento a tiempos cortos (menos de 5 horas), alcanzando un plateau a las 24 horas. La velocidad de incorporación aumentó con la concentración. Llegando al mismo valor de saturación. Se determinó, la viabilidad por tinción con Azul Tripán. Utilizando diferentes concentraciones, períodos de incubación y rangos de longitud de onda, en ningún caso se encontró toxicidad de TMP en oscuridad. Sin embargo, cuando las células fueron iluminadas se observó un incremento en la mortalidad de forma proporcional al tiempo de irradiación y de incorporación del agente fotosensibilizador. Así, cuando TMP fue incorporada por 45 min. y las células irradiadas por 30 min., se alcanzó una mortalidad de ~50%, llegando a ~90% cuando la incorporación fue de 24 h. El espectro de acción de TMP indicó que la mayor mortalidad se produjo en el rango de 400 a 455nm. El tipo de muerte celular observada por tinción con Hematoxilina-eosina y Kit de fragmentación de ADN (Promega) fue apoptosis.