Efecto Fotodinámico de 5, 10, 15, 20-Tetra (4-metoxifenil) Porfirina (TMP) sobre Células Hep-2.

M.G.ALVAREZ,E.I.YSLAS,V.RIVAROLA,G.MORI,M.LAPENNA,J.J.SILVER,E.N.DURANTINI; M.G.ALVAREZ,E.I.YSLAS,V.RIVAROLA,G.MORI,M.LAPENNA,J.J.SILVER,E.N.DURANTINI

Los Cocos, Córdoba

Simposio; XII Simposio Nacional de Química Orgánica, “ Dr. Eduardo Guerrero; 1999

  Abstract             The fotodynamic effect of 5,10,15,20-tetra(4-methoxyphenyl)porphyrin (TMP) on Hep-2 cell lines is reported. The incorporation of TMP was analyzed at different times and photosensitizer concentrations. The irradiation of cell cultures produces cell mortality, while no toxicity was observed in dark condition. Resumen             El efecto fotodinámico de 5,10,15,20-tetra(4-metoxifenyl)porfirin (TMP) fue estudiado sobre líneas celulares Hep-2. La incorporación de TMP fue analizada a diferentes tiempos y concentraciones. La irradiación de los cultivos celulares produce la muerte celular, mientras que no se observa toxicidad en la oscuridad. INTRODUCCIÓN La terapia fotodinámica (PDT) de tumores se basa en la administración de un agente fotosensitizador, el cual es retenido selectivamente en cantidad suficiente por los tejidos tumorales malignos. La posterior iluminación del área afectada, utilizando longitud de onda apropiada, conduce a la muerte del tumor. En la última década se ha acrecentado la utilización de compuestos derivados de macrociclos tetrapirrólicos en combinación con luz visible, como agentes terapéuticos para el tratamiento de tumores.[i] Varios estudios han demostrado que la presencia de oxígeno singlete (1O2) producido después de la exposición del sensitizador a la luz, es la especie principal responsable de la inactivación celular, aunque todavía el mecanismo de acción no está aún completamente establecido. Así, la síntesis de derivados de porfirinas es de gran interés para el desarrollo de nuevos fotosensitizadores específicos para PDT.[ii] PARTE EXPERIMENTAL Cultivos celulares. Células Hep-2 de laringocarcinoma humano. Incorporación del fotosensitizador. Se cuantificó por fluorescencia la incorporación de la porfirina en las células según lo descripto en ref.[iii]. Irradiación. Luz visible. Proyector con lampara de 150 W (26 mW/cm2). Citotoxicidad. La viabilidad se determinó por medio de la tinción con azul Tripán y capacidad proliferativa. RESULTADOS Y DISCUSIÓN Incorporación de TMP. TMP fue incorporada por diferentes periodos de incubación en celulas Hep-2. Se usaron distintas concentraciones de TMP (1-10 mM). La incorporación incrementa rápidamente a tiempos cortos (<5h), alcanzando un plateau. La velocidad de incorporación aumenta con la concentración de TMP al mismo valor de saturación. Citotoxicidad en la oscuridad. La toxicidad producida por TMP fue analizada a distintas concentraciones y periodos de incubación. En ningún case se observó toxicidad en la oscuridad controlada a distintos tiempos por 24 h.. Citotoxicidad en condiciones de irradiación. Las células fueron tratadas con irradiación de luz visible a diferentes periodos de incorporar de TMP. Los resultados indican un incremento en la mortalidad celular con el aumento en el tiempo de irradiación y con mayores tiempos de incorporación. Así, cuando TMP es incorporada por 45 min, la mortalidad es de ~50% después de 30 min de irradiación, mientras que este valor incrementa a ~90% cuando la incorporación fue de 24 h. Además, no se observó toxicidad en la oscuridad en estas condiciones o irradiando el cultivo en ausencia de TMP, por lo tanto la mortalidad celular obtenida después de la exposición a la luz visible de los cultivos celulares se deben al efecto fotosensitizador de TMP producido por la irradiación visible. AGRADECIMIENTOS             Estudios subsidiados por: Fundación Antorchas, SECYT de la UN de Río Cuarto y Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. BIBLIOGRAFIA [i]. L.R. Milgrom and F. O’Neill, “The Chemistry of Natural Products”, Second ed., Chapter 8: Porphyrins, Blackie Academic & Professional, London (1993). [ii]. E. N. Durantini, J. Porphyrins and Phthalocyanines, in press MS#112098 (1999). [iii]. M Cañete, M. Lapeña, A. Juarranz, V. Vendrell, J. I. Borrell, J. Teixidó, S. Nonell, A. Villanueva. Anticancer Drug Design 12, 543 (1997).