Inactivación Fotodinámica de C. albicans Sensibilizada por una Porfirina Tetracatiónica

QUIROGA, E. D.; ÁLVAREZ, M. G. Y DURANTINI, E. N.

Universidad Nacional de Río Cuarto, Facultad de Ciencias Exactas, Físico Químicas y Naturales. Río Cuarto

Jornada; III Jornadas Argentinas de Estudiantes de Biología; 2009

III Jornadas Argentinas de Estudiantes de Biología

La inactivación fotodinámica (PDI) es una nueva modalidad terapéutica en el tratamiento de infecciones fúngicas. Involucra el pretratamiento con un sensibilizador, el cual se acumula en las células microbianas. Luego de la exposición de la luz, causa la producción de oxígeno molecular singlete (1O2), resultando en el fotodaño y la consecuente destrucción celular. En este trabajo fueron estudiadas las propiedades fotodinámicas y la PDI de Candida albicans sensibilizada por 5,10,15,20-tetrakis(N-metil-4-piridil)porfirina (TMPyP). Los estudios espectroscópicos indican que TMPyP presenta un rendimiento cuántico de fluorescencia de fF~0,011 y una producción de 1O2 de FD~0,74. En sistemas biológicos, el efecto citotóxico fue evaluado variando la concentración del sensibilizador (1-10mM) y el tiempo de irradiación con luz visible. Los cultivos tratados con 5 mM del sensibilizador por 30 min mostraron una incorporación de ~3,2±0,2 nmol/106 células. Sin embargo, cuando las suspensiones de células fueron sometidas a una y dos etapas de lavados, para eliminar el exceso de sensibilizador contenido en el sobrenadante, la incorporación fue menor. Los cultivos tratados con 10 mM resultaron tóxicos en la oscuridad. Análisis de C. albicans tratadas con TMPyP mediante microscopia de fluorescencia permitieron observar que el sensibilizador se localiza de manera irregular en toda la célula. Estos estudios fueron corroborados con el marcador nuclear Ho 33258 y el marcador vacuolar CMAC. Los cultivos incubados con 5 mM de TMPyP e irradiados con luz visible (30 min) presentan una disminución de las células viables de ~5 log. Sin embargo, la inactivación celular después de los lavados disminuye debido a que se pierde parte de la porfirina unida débilmente a las células. La inactivación fotodinámica también fue confirmada mediante el retardo en las curvas de crecimiento de C. albicans. Los estudios de microscopia electrónica de trasmisión indican que la integridad de la pared celular de la levadura se altera por el tratamiento fotodinámico. La PDI representa una alternativa interesante para la inactivación y el control del crecimiento de levaduras.