Inactivación Fotodinámica de C. albicans Sensibilizada por una Porfirina Tetracatiónica

QUIROGA, E. D.; ÁLVAREZ, M. G. Y DURANTINI, E. N.

Rosario

Jornada; XIII Jornadas Argentinas de Microbiología; 2008

La inactivación fotodinámica es una nueva metodología propuesta para el tratamiento de afecciones microbianas. En general, involucra la aplicación de un agente sensibilizador, el cual es incorporado en las células de los microorganismos. En presencia de luz de longitud de onda adecuada, el sensibilizador desde su estado excitado produce especies altamente reactivas, tales como oxígeno singlete. Estas sustancias atacan las biomoléculas conduciendo a la pérdida de funcionalidad y la consecuente inactivación celular. En particular, las levaduras están rodeadas por una pared celular rígida y la incorporación del sensibilizador a la célula depende del número y de la distribución de grupos catiónicos en la periferia del macrociclo. En este trabajo fue estudiada la capacidad de 5,10,15,20-tetrakis(N-metil-4-piridil)porfirina (TMPyP) para inactivar cultivos de Candida albicans. Con la finalidad de incorporar la porfirina en las células, los cultivos fueron incubados con diferentes concentraciones del fsesnsibilizador (1-10mM) por 30 min a 37 C en la oscuridad. Posteriormente fueron irradiados con luz visible para generar el efecto fotodinámico. Los resultados muestran que la sobrevivencia celular fue dependiente de la concentración y de la dosis de luz utilizada. El tratamiento de los cultivos (~107 ufc/ml) con 5 mM de TMPyP y 30 min de irradiación produce una disminución de ~5 log en la viabilidad celular, no observándose formación de colonias en estas condiciones para las células tratadas con 10 mM del sensibilizador. Sin embargo, cuando las suspensiones de células fueron sometidas a una etapa de lavado, para eliminar el exceso de sensibilizador contenido en el sobrenadante, la inactivación celular disminuye debido a que se pierde parte de la porfirina unida débilmente a las células. Análisis de C. albicans tratadas con TMPyP mediante microscopía de fluorescencia permitieron observar que el sensibilizador se localiza de manera irregular en toda la célula. Por lo tanto el efecto fotodinámico producido por TMPyP en presencia de luz visible es efectivo para producir la pérdida de la viabilidad celular y representa una alternativa interesante para la inactivación y el control del crecimiento de levaduras. La inactivación fotodinámica es una nueva metodología propuesta para el tratamiento de afecciones microbianas. En general, involucra la aplicación de un agente sensibilizador, el cual es incorporado en las células de los microorganismos. En presencia de luz de longitud de onda adecuada, el sensibilizador desde su estado excitado produce especies altamente reactivas, tales como oxígeno singlete. Estas sustancias atacan las biomoléculas conduciendo a la pérdida de funcionalidad y la consecuente inactivación celular. En particular, las levaduras están rodeadas por una pared celular rígida y la incorporación del sensibilizador a la célula depende del número y de la distribución de grupos catiónicos en la periferia del macrociclo. En este trabajo fue estudiada la capacidad de 5,10,15,20-tetrakis(N-metil-4-piridil)porfirina (TMPyP) para inactivar cultivos de Candida albicans. Con la finalidad de incorporar la porfirina en las células, los cultivos fueron incubados con diferentes concentraciones del fsesnsibilizador (1-10mM) por 30 min a 37 C en la oscuridad. Posteriormente fueron irradiados con luz visible para generar el efecto fotodinámico. Los resultados muestran que la sobrevivencia celular fue dependiente de la concentración y de la dosis de luz utilizada. El tratamiento de los cultivos (~107 ufc/ml) con 5 mM de TMPyP y 30 min de irradiación produce una disminución de ~5 log en la viabilidad celular, no observándose formación de colonias en estas condiciones para las células tratadas con 10 mM del sensibilizador. Sin embargo, cuando las suspensiones de células fueron sometidas a una etapa de lavado, para eliminar el exceso de sensibilizador contenido en el sobrenadante, la inactivación celular disminuye debido a que se pierde parte de la porfirina unida débilmente a las células. Análisis de C. albicans tratadas con TMPyP mediante microscopía de fluorescencia permitieron observar que el sensibilizador se localiza de manera irregular en toda la célula. Por lo tanto el efecto fotodinámico producido por TMPyP en presencia de luz visible es efectivo para producir la pérdida de la viabilidad celular y representa una alternativa interesante para la inactivación y el control del crecimiento de levaduras. La inactivación fotodinámica es una nueva metodología propuesta para el tratamiento de afecciones microbianas. En general, involucra la aplicación de un agente sensibilizador, el cual es incorporado en las células de los microorganismos. En presencia de luz de longitud de onda adecuada, el sensibilizador desde su estado excitado produce especies altamente reactivas, tales como oxígeno singlete. Estas sustancias atacan las biomoléculas conduciendo a la pérdida de funcionalidad y la consecuente inactivación celular. En particular, las levaduras están rodeadas por una pared celular rígida y la incorporación del sensibilizador a la célula depende del número y de la distribución de grupos catiónicos en la periferia del macrociclo. En este trabajo fue estudiada la capacidad de 5,10,15,20-tetrakis(N-metil-4-piridil)porfirina (TMPyP) para inactivar cultivos de Candida albicans. Con la finalidad de incorporar la porfirina en las células, los cultivos fueron incubados con diferentes concentraciones del fsesnsibilizador (1-10mM) por 30 min a 37 C en la oscuridad. Posteriormente fueron irradiados con luz visible para generar el efecto fotodinámico. Los resultados muestran que la sobrevivencia celular fue dependiente de la concentración y de la dosis de luz utilizada. El tratamiento de los cultivos (~107 ufc/ml) con 5 mM de TMPyP y 30 min de irradiación produce una disminución de ~5 log en la viabilidad celular, no observándose formación de colonias en estas condiciones para las células tratadas con 10 mM del sensibilizador. Sin embargo, cuando las suspensiones de células fueron sometidas a una etapa de lavado, para eliminar el exceso de sensibilizador contenido en el sobrenadante, la inactivación celular disminuye debido a que se pierde parte de la porfirina unida débilmente a las células. Análisis de C. albicans tratadas con TMPyP mediante microscopía de fluorescencia permitieron observar que el sensibilizador se localiza de manera irregular en toda la célula. Por lo tanto el efecto fotodinámico producido por TMPyP en presencia de luz visible es efectivo para producir la pérdida de la viabilidad celular y representa una alternativa interesante para la inactivación y el control del crecimiento de levaduras.