Daño Fotodinámico inducido por el Ácido 5 Aminolevúlico-Protoporfirina IX en Líneas Celulares Humanas

M.G. ÁLVAREZ, M. S. LACELLI, A. BATLLE, H. FUKUDA, V. RIVAROLA

Universidad Nacional de Río Cuarto

Congreso; “Semana del Microbiólogo” VI Edición Microbiología y Salud Humana, Animal y Vegetal; 2006

Comisión Directiva de la Asociación Profesionales Microbiólogos de la República Argentina (A.P.M.R.A.)

La terapia fotodinámica (TFD) es un tratamiento anticancerígeno que involucra la administración de un fotosensibilizador, la acumulación del mismo en las células tumorales y la posterior irradiación del área afectada con luz visible. La combinación de los dos elementos individualmente no tóxicos, la droga y la luz, es la responsable de la destrucción de los tejidos malignos mediado por TFD. El ácido 5 aminolevúlico (ALA) induce la acumulación de la protoporfirina IX (PPIX)- molécula fotoactiva- y se lo utiliza para la detección temprana de malignidades. El objetivo de este trabajo fue evaluar los efectos fotodinámicos de ALA-PPIX sobre cultivos de células de adenocarcinoma mamario humano (MCF-7c3) y de laringocarcinoma humano (Hep-2). PPIX se acumula rápidamente  alcanzando un valor de saturación entre las 5 y 24 horas (8 mg/106 y 3,2 mg/106 en células MCF-7c3 y Hep-2 respectivamente). Los estudios de localización celular indican que la droga se acumula en el citoplasma y en el núcleo en las células MCF-7c3, mientras que en las células Hep-2 se ubica en el área perinuclear principalmente en los lisosomas. Los ensayos de índice de supervivencia (medidos por MTT) demuestran que en oscuridad ALA no afecta la viabilidad de ambas líneas celulares hasta la concentración 1mM y 24 horas de incubación. Sin embargo la combinación de ALA-PPIX y la luz visible induce una disminución significativa de la supervivencia celular que depende de la concentración de ALA y del tiempo de irradiación. Por tinciones con Hoechst 33258 de los cultivos celulares incubados 5 horas con ALA-PPIX e irradiados con 54 Jcm-2 se encontró que en las células MCF-7c3 predominaba la morfología típica de la necrosis, mientras que en las células Hep-2 la fragmentación de la cromatina característica de la apoptosis. Estos resultados confirmados por el ensayo TUNEL, nos permiten concluir que los diferentes mecanismos de muerte celular se pueden explicar por las diferencias en el modelo de acumulación de la PPIX y que la respuesta celular a TFD depende de de la dosis de ALA, de la dosis de luz y del tipo celular.