Efecto fotodinámico producido por porfirinas catiónicas sobre los componentes subcelulares de Candida albicans.

CORMICK, M. P., ÁLVAREZ, M. G., PONS, P., ROVERA, M. Y DURANTINI, E. N.

Mendoza

Simposio; Sociedad Argentina de Investigación en Química Orgánica (SAIQO), XVII Simposio Nacional de Química Orgánica; 2009

En los últimos años ha sido propuesta la inactivación fotodinámica (PDI) como una modalidad antimicrobiana para el control de infecciones [1]. En estos sistemas el fotosensibilizador genera especies reactivas de oxígeno, las cuales pueden producir efectos citotóxicos a nivel subcelular, principalmente cambios en la pared o ruptura sobre el ADN [2]. Algunos estudios han concluido que si bien el daño al ADN puede ocurrir, este no sería la causa principal de la fotoinactivación de las células microbianas, principalmente a dosis bajas de irradiación. En este trabajo se evaluó el sitio de acción fotodinámico producido por fotosensibilizadores derivados de porfirinas catiónicas (TFAP+3 y TMAP4+) para la inactivación de Candida albicans. Estas porfirinas emiten fluorescencia a l=655 nm, con un rendimiento cuántico de ~0,1 y oxígeno molecular singlete O2(1Dg) con un rendimiento de ~0,5-0,6. Los estudios con microscopia de fluorescencia revelaron una distribución irregular del sensibilizador en la célula. Luego de la aplicación de sondas fluorescentes específicas del núcleo Hoescht 33258 y de vacuola CMAC se observó que TMAP4+ y TFAP3+ no tiene preferencia por zonas particulares de la célula. Además, las porfirinas TFAP3+ y TMAP4+ presentan una alta afinidad por el ADN, con una constante de unión de Kb=(5,3±0,4)x107 y (7,5±0,3)x105, respectivamente. Los resultados en solución sobre la fotosensibilización del ADN por acción de estas porfirinas indican que el tratamiento produce cortes sobre la estructura del ADN. Este efecto fue evidenciado por electroforesis. In vitro, el daño sobre el ADN cromosomal fue analizado luego del tratamiento de PDI mediante la extracción del mismo. Los resultados no muestran una fragmentación significativa del ADN cromosomal en los tiempos de irradiación utilizados. Mediante microscopia electrónica fue posible confirmar un daño en la pared celular con ambas porfirinas. Por lo tanto, el fotodaño afecta principalmente la pared celular produciendo una pérdida de la funcionalidad, lo cual conduce a la fotoinactivación de las levaduras.